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文檔簡介
1、目的:通過體外觀察熊果酸(Ursolic acid)對人類臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)中KDR(VEGFR2)、ERK1、p-ERK1、c-Jun、CyclinD1表達(dá)的影響,探討熊果酸對HUVECs增殖的影響及其機(jī)制。
方法:體外培養(yǎng)HUVECs,經(jīng)熊果酸按濃度梯度:0、5、10、20、40、80μmol/L處理36h和熊果酸20μmol/L按時間梯度:0、12、24、36、48h處理。MTT和臺盼藍(lán)染色法檢測熊果
2、酸對人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用;Western blot法檢測KDR、ERK1、p-ERK1、c-Jun和cyclinD1蛋白的表達(dá)情況。免疫熒光法檢測ERK1、p-ERK1、KDR蛋白的表達(dá)和細(xì)胞定位;激光共聚焦掃描顯微鏡檢測ERKl蛋白的表達(dá)和移位情況。
結(jié)果:熊果酸對人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的抑制作用呈劑量-時間依耐性(P＜0.05);HUVECs經(jīng)熊果酸處理36h的半數(shù)抑制濃度為20μmol/L:Western blo
3、t結(jié)果顯示熊果酸抑制KDR、ERK1、p-ERK1、c-Jun和cyclinD1蛋白的表達(dá)呈時間依耐性(P＜0.05);免疫熒光法顯示,經(jīng)熊果酸處理后,p-ERK1、ERK1、KDR蛋白的熒光強(qiáng)度比空白對照組和溶劑對照組明顯減弱,且具有時間依耐性;激光共聚焦掃描顯微鏡顯示經(jīng)熊果酸處理的ERK1蛋白的熒光強(qiáng)度與空白對照組相比,明顯減弱,且隨著時間的增加,ERK1核內(nèi)表達(dá)的熒光強(qiáng)度也逐漸減弱。
結(jié)論:熊果酸可經(jīng)ERK信號通路抑
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