羊痘病毒P32基因的克隆與表達(dá).pdf

1、羊痘病毒(Capripoxvirus，CPV)是山羊痘病和綿羊痘病的病原。結(jié)構(gòu)蛋白P32是CPV的特異蛋白，包含病毒粒子的主要抗原決定簇，并且P32基因具有很高的保守性，對(duì)CPV具有診斷意義?！　”緦?shí)驗(yàn)根據(jù)GenBank中發(fā)表的山羊痘病毒(Goatpoxvirus，GTPV)P32基因序列，利用軟件Primer5.0分別設(shè)計(jì)了P32鑒定和表達(dá)用引物。從感染羊痘的山羊和綿羊痂皮以及山羊痘病毒疫苗感染的羊胎皮膚細(xì)胞培養(yǎng)物中提取DNA，利用

2、PCR方法分別擴(kuò)增出大約1kb的DNA片段，將其插入克隆載體pMD18-T并測(cè)序。結(jié)果表明：GTPVP32基因開(kāi)放閱讀框(ORF)全長(zhǎng)969bp，編碼323個(gè)氨基酸；綿羊痘病毒(Sheeppoxvirus，SPPV)P32基因ORF全長(zhǎng)972bp，編碼324個(gè)氨基酸；羊胎皮膚細(xì)胞分離毒(FGD-CPV)P32基因ORF全長(zhǎng)969bp，編碼323個(gè)氨基酸。將基因序列與GenBank上已公布的P32基因序列相比較，各基因間序列相似率很高，證

3、明CPV的P32基因高度保守?！　?shí)驗(yàn)中構(gòu)建了帶有完整P32基因的Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)載體Bac-Bac1-P32、Bac-BacHTa-P32和大腸桿菌表達(dá)載體pPRO-P32。將Bac-Bacl-P32、Bac-BacHTa-P32轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞，pPRO-P32轉(zhuǎn)化大腸桿菌后，均未見(jiàn)目的蛋白的表達(dá)?！　∫訮CR方法擴(kuò)增了切去跨膜結(jié)構(gòu)的P32基因片段，構(gòu)建了表達(dá)部分P32基因的大腸桿菌表達(dá)載體pPRO-TRUNCP3