表達裂谷熱病毒糖蛋白重組山羊痘病毒的研究.pdf

1、裂谷熱(RftValleyFever，RVF)是反芻動物和人共患的一種烈性傳染病，可通過蟲媒(庫蚊等)及直接接觸等途徑傳播，具有傳染性強、致死率高、易感動物廣泛等特性。RVF每次流行均造成巨大的社會經濟損失和公共衛(wèi)生危機。國際獸醫(yī)局(OIE)已將RVF列為A類傳染病，也是國際上重要的生物武器研究對象及生物反恐防范對象。RVF主要流行于非洲，2000年前后蔓延至中東及阿拉伯半島。近年，南亞地區(qū)也有跡象表明存在該病毒的流行。隨著全球化貿易、

2、人員交往快速發(fā)展及全球氣候變暖趨勢的加速，我國面臨RVF等新發(fā)傳染病的威脅也越來越嚴重，急需開展疫苗、診斷監(jiān)察技術等相關防控技術的研究。 裂谷熱病毒(RiftValleyFeverVirus，RVFV)為布尼安病毒科(Bunyaviridae)的Phlebovirus屬成員，僅一個血清型。囊膜糖蛋白G是RVFV的主要結構蛋白及保護性免疫原，由基因組M節(jié)段編碼，翻譯后裂解為GN和GC兩個亞單位。 山羊痘病毒(Goatpox

3、virus，GPV)宿主范圍明確，主要限于山羊和牛等反芻獸。GPV基因組容量大，遺傳性穩(wěn)定，復制非必需區(qū)明確，可耐受大片段外源基因的插入、重組和表達，作為重組病毒載體疫苗不影響流行病血清學監(jiān)測。 本研究首先以我國自行培養(yǎng)并得到廣泛應用的山羊痘病毒(GPV)疫苗株為載體，以復制非必需區(qū)TK基因為插入靶點，通過同源重組，構建了痘病毒晚期啟動子p11驅動、內部核糖體進入位點(ires)介導的黃嘌呤鳥嘌呤磷酸轉移酶基因(gpt)和綠熒光

4、蛋白基因(gfp)串聯(lián)表達的重組病毒rGPV-gpt-ires-egfp。在此基礎上，進一步構建痘病毒早晚期啟動子p7.5驅動RVFV保護性抗原G基因片段重組病毒rGPV-gie-rvfv-g(n+c)，利用霉酚酸(Mycophenoiicacid,MPA)藥物篩選后，經PCR、Western-blot和IFA(間接免疫熒光)方法證實G蛋白在重組病毒中穩(wěn)定表達，并被有效裂解為GN和GC兩個亞單位，重組病毒具有良好細胞生長特性。本研究為R