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文檔簡介
1、PTIP蛋白,又名為PAXIP1(Homo sapiens),全稱PAX Transcription activation domainInteracting Protein,含有6個BRCT結(jié)構(gòu)域和中間的poly-Q區(qū)域。已有的研究表明PTIP蛋白可以通過招募多種蛋白質(zhì)參與不同的生理過程,例如N端2個BRCT與PA1組成的復合物參與免疫球蛋白重鏈(IgH)類型轉(zhuǎn)換重組(CSR),C端的BRCT與53BP1相互作用參與DNA損傷應(yīng)答與修
2、復,還與組蛋白修飾相關(guān)的蛋白ALR(MLL2)、MLL3/MLIA和UTX等組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶(HMT)或組蛋白去甲基化酶相互作用,提示PTIP可能在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中具有重要作用。
我們實驗室前期在果蠅中鑒定出了一個小鼠ptip的直系同源基因,ptip基因敲除的果蠅表現(xiàn)出胚胎蛹前期致死,而mPtip可以拯救ptip突變果蠅。最近的報道提示在果蠅中PTIP可能屬于TRR/COMPASS復合物,具有H3K4me3的催化活性,可以調(diào)控基因
3、的激活。這與我們實驗室前期發(fā)現(xiàn)ptip在果蠅發(fā)育中的發(fā)揮作用并調(diào)控果蠅發(fā)育相關(guān)基因如even skipped,fushi tarazu和Engrailed的表達等研究結(jié)果相吻合。
本文中,我們?yōu)榱诉M一步研究ptip在PcG/trxG轉(zhuǎn)錄調(diào)控中可能涉及的表觀調(diào)控機制,將利用果蠅遺傳學研究ptip和PcG在果蠅翅膀中的遺傳學相互作用。同時利用細胞實驗探討ptip在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中所處的地位。以下是本論文的主要結(jié)果:
1.pti
4、p的突變能增強PcG突變所具有的翅膀表型
PcG成員突變后會導致雄性果蠅的第二及第三對足上出現(xiàn)多余的性梳,這種表型稱為同源異形轉(zhuǎn)化。ptip突變體本身不具有這種同源異形轉(zhuǎn)化表型,而前期我們發(fā)現(xiàn)ptip在性梳表型上有增強PcG的功能?;谶@個發(fā)現(xiàn),我們利用了另一PcG相關(guān)的翅膀表型進一步驗證了ptip在PcG轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用,并發(fā)現(xiàn)ptip的不同突變體ptipPBac和ptipDf對Pc突變體pc3在翅膀表型上都具有增強的作用。
5、另外,我們做了PcG靶基因Ubx的免疫染色實驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn)ptip突變能顯著增強Pc突變造成的Ubx異位表達。因此我們進一步確認了ptip對PcG抑制功能的協(xié)同作用,并從分子/基因水平對這一遺傳學的相互作用做出了解釋。
2.ptip影響果蠅Kc細胞中管家基因的表達
為了研究ptip遺傳學上增強PcG的可能機制,我們利用Kc細胞RNAi實驗從mRNA水平檢測了ptip對PcG/trxG轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響。首先,我們實驗室已經(jīng)
6、知道ptip knockdown(KD)對許多PcG靶基因的表達都有一定影響,本文又發(fā)現(xiàn)ptip KD對于多種管家基因如actin、gapdh、rp49、卻的表達也都有一定影響,這說明ptip可能普遍對于基因的激活是必需的。同時,Ubx的mRNA表達結(jié)果表明ptip共KD能明顯增強Pc KD的作用,這一結(jié)果與本文翅膀表型的結(jié)果相對應(yīng)但與我們前期tip在分子水平去阻遏的研究結(jié)果相反。我們認為這些結(jié)果揭示出ptip功能有一定復雜性,而它在P
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