載脂蛋白F轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、目的:載脂蛋白F(apolipoprotein F,ApoF)與血脂異常密切相關(guān),本課題主要是研究ApoF的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。
　　方法:構(gòu)建ApoF啟動(dòng)子區(qū)全長及一系列分段克隆,通過熒光素酶報(bào)告基因確定上游啟動(dòng)子關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)。并通過TFSEARCH和TESS軟件預(yù)測(cè)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。此外,通過位點(diǎn)定點(diǎn)突變、轉(zhuǎn)錄因子及其相應(yīng)顯性失活突變體過表達(dá)、電泳遷移率實(shí)驗(yàn)和染色質(zhì)免疫共沉淀進(jìn)一步驗(yàn)證該區(qū)域的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)

2、。
　　結(jié)果:1.載脂蛋白F啟動(dòng)子5‘端上游-198nt~+79nt區(qū)域是保留ApoF啟動(dòng)子最大活性的關(guān)鍵調(diào)控區(qū);2.發(fā)現(xiàn)調(diào)控ApoF表達(dá)的ETS-1、HNF3及C/EBP轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn);3.ApoF的啟動(dòng)子活性在肝組織來源的細(xì)胞株最高;4.成功構(gòu)建ETS-1、ETS-2的表達(dá)克隆及其相應(yīng)顯性失活突變體;5.過表達(dá)ETS-1及ETS-2增加ApoF的啟動(dòng)子活性,過表達(dá)ETS-1、ETS-2顯性失活突變體抑制ApoF啟動(dòng)子的活性。