高致病性H5N1型流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf

1、A型流感病毒是引起流行性感冒的主要病原體，具有高度變異性，能夠感染人和多種動(dòng)物，常常引起流感大流行，造成嚴(yán)重的損失和傷亡。而其中的H5N1亞型具有高致病性，能夠跨種族傳播，引起了全球的廣泛關(guān)注與重視。A型流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1是其傳播與感染過(guò)程中的重要毒力因子，在感染細(xì)胞中有高水平的表達(dá)，能夠通過(guò)多種RNA-蛋白相互作用和蛋白-蛋白相互作用幫助病毒復(fù)制，阻止被感染細(xì)胞凋亡以及拮抗宿主的免疫系統(tǒng)進(jìn)攻。
　　 NS1蛋白全長(zhǎng)包含兩

2、個(gè)結(jié)構(gòu)域，一個(gè)是N端的RNA結(jié)合區(qū)（RBD），NS1通過(guò)該結(jié)構(gòu)域與病毒mRNA相互作用，調(diào)節(jié)病毒特異性蛋白的翻譯，從而增強(qiáng)病毒的復(fù)制;另一個(gè)是C端的效應(yīng)區(qū)(ED)，NS1通過(guò)該結(jié)構(gòu)域和其他蛋白相互作用來(lái)阻斷宿主(Ⅰ)型干擾素IFN的組裝，抑制干擾素誘導(dǎo)蛋白的激活，從而逃避或拮抗宿主的免疫系統(tǒng)。同時(shí)，NS1蛋白能夠與多種其他蛋白相互作用，參與細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路的傳導(dǎo)，如NS1能夠與Crk家族蛋白相互作用激活PI3K信號(hào)通路。可以看出，NS

3、1作為一種多功能調(diào)節(jié)蛋白，對(duì)流感病毒的毒性起著至關(guān)重要的作用。因此解析H5N1亞型NS1蛋白全長(zhǎng)的晶體結(jié)構(gòu)以及其與相互作用蛋白復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)對(duì)于我們進(jìn)一步了解A型流感病毒的致病機(jī)制具有重要意義，為研究開(kāi)發(fā)更有效的流感病毒抑制劑提供結(jié)構(gòu)生物學(xué)依據(jù)。
　　 本課題中我們通過(guò)分子克隆技術(shù)，將NS1蛋白的全長(zhǎng)野生型基因序列和突變型基因序列構(gòu)建到原核表達(dá)載體pGEX-4T-1和pET-28a中。采用原核表達(dá)系統(tǒng)重組表達(dá)可溶的目的蛋白，提