羅格列酮對哮喘大鼠NF-κB表達及氣道炎癥的影響.pdf

1、目的:觀察羅格列酮對哮喘大鼠細(xì)胞核因子-Kappa B(nuclearfactor-[kappa]B，NF-κB)、血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growthfactor-β1，TGF-β1）表達的影響。建立大鼠哮喘模型，通過觀察羅格列酮干預(yù)后肺組織NF-κBp65表達及血清TGF-β1濃度的變化，探討NF-κB在氣道炎癥及重塑中的作用及羅格列酮對其影響。
　　方法:將30只清潔級SD大鼠（雌性，6周齡，體重1

2、20g-150g之間）隨機分成正常對照組、哮喘模型組和羅格列酮干預(yù)組，每組10只。哮喘組大鼠于實驗第1、8天腹腔注射卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)100mg和氫氧化鋁100mg（混于生理鹽水2mL中）進行致敏。第15天起將大鼠置于自制的非完全密閉霧化吸入箱內(nèi)，給予OVA溶液霧化吸入，隔日1次，每次30min，共激發(fā)20次。卵清蛋白溶液濃度按照1％、1.5％、2％、2.5％、3％依次遞增，每4次激發(fā)后調(diào)整一次。正常對照組以等量生理

3、鹽水代替OVA，方法同上。羅格列酮組則在每次OVA霧化吸入前30min按5mg/kg經(jīng)口腔灌服方式給予大鼠羅格列酮。末次激發(fā)24小時后用1％戊巴比妥鈉麻醉大鼠，取材。收集各組大鼠支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolarlavage fluid,BALF)、血清及肺組織。測定BALF中細(xì)胞計數(shù)及分類;部分肺組織行病理切片，行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色，觀察形態(tài)學(xué)變化，并應(yīng)用計算機圖像分析軟件測定支

4、氣管管壁厚度（總管壁面積/支氣管基底膜周徑）、支氣管平滑肌厚度;分別用RT-PCR及免疫組化的方法測定肺組織中NF-κBp65的表達，應(yīng)用圖像分析軟件測定NF-κBp65的相對表達強度;ELISA法測定血清中TGF-β1的濃度。
　　結(jié)果:
　　1、哮喘模型的建立
　　通過腹腔注射卵清蛋白致敏及反復(fù)霧化吸入激發(fā)的方式成功建立大鼠哮喘模型，于實驗過程中可見哮喘大鼠精神萎靡、煩躁不安、呼吸急促、腹肌痙攣、站立不穩(wěn)、反應(yīng)遲鈍

5、等表現(xiàn)。
　　2、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞計數(shù)及分類:
　　哮喘組BALF中細(xì)胞總數(shù)（35.21±0.51）高于羅格列酮組（14.98±0.67），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);且其均高于正常對照組（9.49±0.10），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=7563.975，P＜0.01)。
　　哮喘組BALF中性粒細(xì)胞數(shù)（0.26±0.05）高于羅格列酮組（0.58±0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)

6、;且其均高于正常對照組（0.26±0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=664.996，P＜0.01）。
　　哮喘組BALF淋巴細(xì)胞數(shù)（2.83±0.08）高于羅格列酮組（2.15±0.04），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);且其均高于正常對照組（1.31±0.03），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=1966.297，P＜0.01）。
　　哮喘組BALF嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)（3.53±0.06）高于羅格列酮組（1.27±0.06），差異

7、具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);且其均高于正常對照組（0.52±0.08），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=5294.103，P＜0.01）。
　　3、病理圖像分析結(jié)果:
　　哮喘組大鼠肺組織病理切片可見氣管及血管周圍炎癥細(xì)胞明顯增多，支氣管黏膜破壞、上皮細(xì)胞脫落、粘液分泌增多，氣道平滑肌明顯增厚。羅格列酮干預(yù)后可明顯減輕以上病理改變。圖像分析結(jié)果示:哮喘組大鼠的氣道壁厚度（μm2/μm）與平滑肌厚度（μm2/μm）（98.49±2

8、.58;45.29±2.26）均高于羅格列酮組（86.03±2.63;33.54±1.35），有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);兩組又均高于對照組（70.75±2.10;17.62±1.12），有統(tǒng)計學(xué)意義(F=323.15，P＜0.01; F=704.562,P＜0.01)。
　　4、RT-PCR測定肺組織NF-κBp65mRNA的表達:
　　哮喘組大鼠肺組織NF-κBp65mRNA表達（0.741±0.020）高于羅格列酮組

9、（0.490±0.024），存在統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);且兩組均高于正常對照組（0.342±0.003），存在統(tǒng)計學(xué)意義(F=1267.128，P＜0.01)。
　　5、免疫組化法測定肺組織NF-κ Bp65的表達:
　　哮喘組大鼠肺組織中NF-κBp65的平均光度值（0.51±0.09）高于羅格列酮組（0.42±0.04），有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;兩組均高于對照組（0.27±0.06），有統(tǒng)計學(xué)意義(F=36.1

10、09，P＜0.01)。
　　6、ELISA法測定血清中TGF-β1的含量(ng/ml):
　　哮喘組大鼠血清中的TGF-β1含量（30.63±1.76）高于羅格列酮組（23.57±0.97），有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，兩組均高于對照組（17.13±1.13），有統(tǒng)計學(xué)意義（F=257.16，P＜0.01）。
　　7相關(guān)性分析結(jié)果:肺組織中NF-κ Bp65mRNA及NF-κ Bp65含量與BALF中細(xì)胞總數(shù)呈顯著正

11、相關(guān)(r=0.979，P＜0.01; r=0.777，P＜0.01)，與血清TGF-β1的表達水平呈顯著正相關(guān)(r=0.965，P＜0.01;r=0.907，P＜0.01);TGF-β1與平滑肌厚度顯著正相關(guān)（r=0.986，P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1、通過抗原致敏和反復(fù)霧化激發(fā)，成功建立了大鼠哮喘模型。病理結(jié)果顯示哮喘組大鼠氣道中存在明顯的炎性細(xì)胞浸潤、氣道壁及平滑肌增厚，而羅格列酮干預(yù)可明顯減輕上述病理表現(xiàn)。<

12、br>　　2、哮喘組大鼠肺組織中NF-κ Bp65在基因和蛋白水平的表達明顯高于對照組，提示哮喘的發(fā)生可能與NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活有關(guān)。羅格列酮組大鼠肺組織中NF-κ Bp65在基因和蛋白水平的表達均低于哮喘組而高于對照組，提示羅格列酮可抑制NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。
　　3、羅格列酮可降低哮喘大鼠血清中TGF-β1的水平，可減輕氣道重塑。
　　4、相關(guān)性分析結(jié)果顯示大鼠肺組織NF-κ Bp65的表達水平與BALF