辛伐他汀對(duì)哮喘大鼠氣道重塑及炎癥影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：本研究通過(guò)觀察大鼠血清中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforminggrowth factor-β1，TGF-β1)、IL-4及IFN-γ，氣道中RAS及ERK蛋白的表達(dá)，探討：(1)辛伐他汀抑制Ras-MAPK信號(hào)通路激活的機(jī)制。(2)辛伐他汀通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡，減輕哮喘的氣道炎癥。(3)辛伐他汀通過(guò)抑制血清中TGF-β1水平及膠原沉積減輕哮喘氣道重塑。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)將40只體重在130-150g之間的雄性SD

2、大鼠，隨機(jī)分成五組，分別為：對(duì)照組；哮喘模型組；辛伐他汀20mg/kg組；辛伐他汀40mg/kg組；辛伐他汀60mg/kg組。哮喘組及辛伐他汀組均采用OVA致敏和激發(fā)，不同的是辛伐他汀組在每次激發(fā)前30分鐘給予不同劑量辛伐他汀即20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg灌胃。而對(duì)照組致敏和激發(fā)均采用生理鹽水。所有大鼠于末次激發(fā)24小時(shí)后先用1％戊巴比妥鈉麻醉，進(jìn)行肺功能檢查測(cè)定呼氣峰值變化。然后收集肺泡灌洗液、血清及肺組織。ELIS

3、A法檢測(cè)血清中TGF-β1、IL-4和IFN-γ的水平；肺組織HE染色后測(cè)定支氣管基底膜周徑(Pbm)、總管壁面積(WAt)和平滑肌面積(WAm)；馬松染色后檢測(cè)氣道壁膠原的表達(dá)；計(jì)數(shù)灌洗液中細(xì)胞數(shù)；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠氣道中RAS蛋白和ERK蛋白的表達(dá)，并進(jìn)行定量分析。
　　結(jié)果：
　　1肺功能結(jié)果：隨著乙酰膽堿濃度的增加，哮喘組及辛伐他汀組大鼠呼氣峰值均顯著降低，即氣道阻力明顯升高，但辛伐他汀組呼氣峰值較哮喘組均有所升

4、高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)及其分類計(jì)數(shù)的結(jié)果：哮喘組與辛伐他汀組細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)均高于正常對(duì)照組(F=64.126 P＜0.01，F(xiàn)=133.766 P＜0.01)，但辛伐他汀組均明顯低于哮喘模型組(P＜0.05)。高劑量辛伐他汀組細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均低于低劑量辛伐他汀組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3病理結(jié)果：哮喘大鼠肺組織可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、平滑肌細(xì)胞增生

5、、管壁增厚、上皮細(xì)胞脫落及粘液分泌增多。而辛伐他汀組可明顯減少上述改變。各組支氣管壁厚度、平滑肌層厚度分別為：正常對(duì)照組(59.07±10.95，12.85±2.47)、哮喘模型組(90.91±13.80，38.49±3.37)、辛伐他20mg/kg組(80.64±14.30，31.28±2.61)、40mg/kg組(73.87±11.97，24.53±2.73)、60mg/kg組(66.88±11.47，17.05±2.65)。對(duì)照組

6、低于哮喘組及辛伐他汀組(F=34.553P＜0.01，F(xiàn)=100.925 P＜0.01)；哮喘組高于辛伐他汀組(P＜0.01)；高劑量辛伐他汀組低于低劑量組(P＜0.05)。
　　4膠原沉積的結(jié)果：與正常對(duì)照組(0.0184±0.0034)相比，哮喘模型組(0.0634±0.0071)、辛伐他汀20mg/kg組(0.0463±0.0058)、40mg/kg組(0.0416±0.0058)及60mg/kg(0.0276±0.006)

7、明顯增加。(F=65.778，P＜0.01)；其中哮喘組高于辛伐他汀組(P＜0.01)；高劑量辛伐他汀組低于低劑量組(P＜0.01)。
　　5血清ELISA法檢測(cè)IL-4、IFN-γ及TGF-β1結(jié)果：
　　IL-4、TGF-β1水平：與正常對(duì)照組(174.34±40.64，56.83±10.62)相比，哮喘組(475.71±55.56，11.86±3.17)、辛伐他汀20mg/kg組(362.91±37.59，162.03

8、±15.51)、40mg/kg組(284.62±34.15，136.87±9.55)、60mg/kg組(225.18±26.92，87.07±8.88)明顯增加(F=64.617 P＜0.01，F(xiàn)=124.41 P＜0.01)；其中哮喘組高于三個(gè)辛伐他汀組(P＜0.05)。高劑量辛伐他汀組低于低劑量組(P＜0.05)。
　　IFN-γ水平：與正常對(duì)照組(51.26±8.59)相比，哮喘模型組(11.86±3.17)、辛伐他汀20m

9、g/kg組(22.11±4.82)、40mg/kg組(34.52±4.95)、60mg/kg組04.70±4.16)4顯減少(F=61.541，P＜0.01)；其中哮喘組低于三個(gè)辛伐他汀組(P＜0.05)；高劑量辛伐他汀組高于低劑量組(P＜0.05)。
　　6大鼠氣道免疫組織化學(xué)RAS及ERK蛋白的表達(dá)：
　　ERK、RAS的平均光密度值：與正常對(duì)照組(0.1263±0.058，0.0926±0.016)相比，哮喘組(0.4

10、963±0.078，0.2515±0.0417)、辛伐他汀20mg/kg組(0.3955±0.084，0.2138±0.0299)、40mg/kg組(0.3069±0.076，0.1727±0.031)、60mg/kg組(0.2162±0.077，0.1320±0.0258)明顯增加(F=27.531 P＜0.01，F(xiàn)=31.334 P＜0.01)；其中哮喘組高于三個(gè)辛伐他汀組(P＜0.05)。高劑量辛伐他汀組低于低劑量組(P＜0.05

11、)。
　　7相關(guān)性分析結(jié)果：大鼠氣道中ERK蛋白的表達(dá)與膠原表達(dá)、血清中TGF-β1及IL-4水平均成顯著正相關(guān)(r=0.861，P＜0.05，r=0.901，P＜0.01，r=0.822，P＜0.05)，與IFN-γ水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.822，P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1哮喘組大鼠氣道中RAS及ERK蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組，提示哮喘的發(fā)生可能與RAS-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活有關(guān)。三個(gè)辛伐他汀組大鼠

12、氣道中RAS及ERK蛋白表達(dá)均低于哮喘組而高于對(duì)照組提示辛伐他汀可抑制RAS-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。
　　2辛伐他汀可降低哮喘大鼠血清中IL-4及TGF-β1的水平，提高血清中IFN-γ的水平。
　　3大鼠氣道ERK蛋白表達(dá)與膠原沉積、血清中TGF-β1及IL-4水平呈正相關(guān)，與IFN-γ水平呈負(fù)相關(guān)。提示辛伐他汀通過(guò)下調(diào)膠原及TGF-β1水平，發(fā)揮抑制氣道重塑的作用；通過(guò)上調(diào)IFN-γ的表達(dá)水平，下調(diào)IL-4的表達(dá)水