羅格列酮對(duì)糖尿病大鼠肝臟損傷的影響.pdf

1、目的：⑴研究鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)SD大鼠糖尿病模型的建立，并觀察模型穩(wěn)定性。⑵研究糖尿病大鼠的肝臟組織病理變化。⑶探討糖尿病大鼠肝臟組織中還氧化酶-2（COX-2）的炎癥表達(dá)情況。⑷探討糖尿病大鼠肝臟組織細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因FasL mRNA的表達(dá)。⑸探討羅格列酮對(duì)糖尿病大鼠肝臟病理、COX-2 mRNA和蛋白表達(dá)、細(xì)胞凋亡以及FasL mRNA表達(dá)等的影響。 方法：①16只SD大鼠隨機(jī)分為兩組，正常對(duì)照組(NC，8只)：

2、腹腔注射0.1M，pH4.5檸檬酸緩沖液；糖尿病組(DM，8只)：腹腔注射含STZ 60mg/kg 0.1M，pH4.5檸檬酸緩沖液，定期檢測大鼠血糖。②16只SD大鼠分為兩組，正常對(duì)照組（NC,8只），糖尿病組（DM，8只）。DM組用STZ 60mg/kg 腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。于八周末處死兩組動(dòng)物取其肝臟組織，然后用4％的多聚甲醛固定。肝組織石蠟切片，HE染色，顯微鏡下觀察肝臟組織的病理學(xué)變化。③16只SD大鼠隨機(jī)分為兩組，正

3、常對(duì)照組(NC，8只)，糖尿病組(DM，8只)。成模8周后，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄－多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測肝臟組織中COX-2 mRNA的表達(dá)情況,應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測肝臟組織COX-2蛋白的表達(dá)。④16只SD大鼠隨機(jī)分為兩組，正常對(duì)照組(NC，8只)，糖尿病組(DM，8只)。成模8周后，用細(xì)胞凋亡原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)對(duì)肝臟組織的細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行分析凋亡指數(shù)，采用逆轉(zhuǎn)錄－多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測肝臟組織中FasL mR

4、NA的表達(dá)。⑤SD大鼠24只，分為正常對(duì)照組（NC，8只）、糖尿病組（DM，8只）和糖尿病加羅格列酮干預(yù)組（RSG，8只）。8周后用HE染色光鏡下觀察肝臟病理改變，用逆轉(zhuǎn)錄－多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和免疫組織化學(xué)法分別檢測肝臟COX-2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平，用細(xì)胞凋亡原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)對(duì)肝細(xì)胞凋亡進(jìn)行分析凋亡指數(shù)(AI)，并用RT-PCR檢測凋亡相關(guān)基因FasL mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果：⑴腹腔注射STZ

5、后DM組大鼠出現(xiàn)血糖升高，和正常對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.05）。成模大鼠于注射后72h，血糖均穩(wěn)定維持在≥16. 7mmol/L的水平，同時(shí)成模后即出現(xiàn)多飲、多食、多尿和體重減輕等表現(xiàn)，其癥狀體征與臨床病人比較相似。⑵HE染色可見糖尿病組（DM）肝細(xì)胞失去正常的索狀結(jié)構(gòu)，肝竇變窄，肝細(xì)胞索之間纖維細(xì)胞增生。肝細(xì)胞腫脹，出現(xiàn)明顯的脂肪變性，可見點(diǎn)灶狀壞死，淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤。正常對(duì)照組（NC）肝小葉結(jié)構(gòu)良好，肝細(xì)胞的索狀結(jié)構(gòu)

6、清楚，肝竇正常，肝細(xì)胞無脂肪變性和炎性細(xì)胞浸潤。⑶糖尿病組大鼠肝臟組織COX-2 mRNA表達(dá)高于正常對(duì)照組(P<0.01)，COX-2蛋白表達(dá)水平亦顯著增加。⑷糖尿病大鼠肝臟組織凋亡細(xì)胞明顯增多，凋亡細(xì)胞多位于中央靜脈周圍和匯管區(qū)，凋亡指數(shù)為25.45±3.06，和正常對(duì)照組(1.31±0.44)相比有顯著差異(P<0.05)，F(xiàn)asL mRNA表達(dá)也顯著高于正常對(duì)照組(P<0.01)。⑸HE染色可見糖尿病組肝細(xì)胞失去正常的索狀結(jié)構(gòu)，

7、肝竇變窄，肝細(xì)胞索之間纖維細(xì)胞增生。肝細(xì)胞腫脹，出現(xiàn)明顯的脂肪變性，可見點(diǎn)灶狀壞死，淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤。羅格列酮組肝細(xì)胞的索狀結(jié)構(gòu)清楚，肝竇較正常，肝細(xì)胞脂肪變性和炎性浸潤明顯減輕。糖尿病組肝臟組織COX-2 mRNA表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組（P< 0.01），羅格列酮組表達(dá)較糖尿病組減少（P< 0.01）,免疫組化示糖尿病組COX-2蛋白表達(dá)也高于其他兩組。糖尿病組大鼠肝細(xì)胞凋亡明顯增多，凋亡指數(shù)為25.45±3.06，與正常對(duì)照

8、組(1.31±0.44) 相比顯著升高(P<0.05)，羅格列酮組（2.02±0.55）較糖尿病組減少(P<0.05)。FasL mRNA在糖尿病組表達(dá)增高，羅格列酮組較糖尿病組表達(dá)下降，兩組相比有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)論：①STZ60mg/kg腹腔注射可以成功制備糖尿病大鼠模型，且具有較好的穩(wěn)定性。②糖尿病可以引起大鼠肝臟出現(xiàn)明顯的組織病理損傷。③證實(shí)了糖尿病可引起肝臟組織COX-2 mRNA和蛋白表達(dá)增加，提示在糖