豬雞腸道益生菌株的分離鑒定及其抗TGEV和IBV的作用.pdf

1、本實驗從健康的雛雞和仔豬盲腸中分離鑒定出三株益生菌,采用MTT和細胞病變方法,分別在雞胚成纖維細胞(CEF)和PK-15細胞模型上初步評價了三株益生菌對TGEV和IBV抑制率的影響,探討益生菌的抗病毒作用。
　　 實驗中首先利用革蘭氏染色,生化試驗,16SrRNA,抑菌試驗等方法分離鑒定出了三株益生菌,分別命名為:L1-德氏乳桿菌德氏亞種(Lactobacillus.delbrueckii subsp.delbrueckii)、

2、L2-德氏乳桿菌乳亞種(Lactobazillus.delbrueckii subsplactis)和L3-德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)。利用MTT法測定益生菌處理后的細胞活性,經(jīng)統(tǒng)計分析得出益生菌對細胞的最大無毒濃度為L1株1011cfu/ml,L2株1012cfu/ml,L3株1012cfu/ml,益生菌培養(yǎng)上清1:2的稀釋液,益生菌滅活菌體和破碎菌體

3、成分在實驗濃度均未顯現(xiàn)細胞毒害現(xiàn)象。
　　 根據(jù)上述實驗結(jié)果開展下列益生菌的抗病毒作用研究。實驗分組:第1組:益生菌與上述2種細胞預先分別孵育后再攻毒:第2組:2種細胞感染病毒后再接入益生菌;第3組:益生菌與病毒同時接入細胞;第4組:益生菌對照;第5組:病毒對照;第6組:正常細胞對照。實驗結(jié)果:以MTT法測定益生菌和病毒(TGEV和IBV)處理后的細胞活性,通過公式計算病毒抑制率。結(jié)果表明,無論是在PK-15細胞上,還是在CEF

4、細胞上,益生菌成分和不同加入方式均可顯著地提高益生菌對TGEV和IBV的抑制率(P＜0.05),并且這種作用具有量效關(guān)系和時效關(guān)系。
　　 益生菌-細胞-病毒相互作用后的細胞病變結(jié)果顯示,益生菌及其培養(yǎng)上清與。TGEV和IBV同時接入細胞可以極顯著的阻礙TGEV和IBV引發(fā)的細胞病變,推測其可能具有直接的殺滅病毒作用。在實驗中,我們分別研究了益生菌活菌、培養(yǎng)上清、滅活菌體和破碎菌體成分的抗病毒作用,結(jié)果表明,益生菌的各種形式均具

5、有一定的抗病毒作用,但在效果上存在一定的差異,原因可能是其抗病毒作用的機制不同。益生菌與細胞作用后再感染病毒,對TGEV和IBV抑制率升高的結(jié)果反映出了益生菌對TGEV和IBV吸附細胞的阻斷作用;從益生菌與病毒同時接入細胞后降低病毒對細胞侵害的現(xiàn)象,可以看出益生菌可能對病毒具有直接破壞作用;細胞感染病毒后再接入益生菌對TGEV和IBV抑制率極低的現(xiàn)象說明,病毒感染后益生菌再很難發(fā)揮作用。
　　 綜上所述,在體外益生菌對TGEV和