抑致病菌益生菌菌株及其胞外多糖抗TGEV作用的比較分析.pdf

1、本研究選擇豬糞便中初步分離的50株益生菌菌株，分別通過(guò)檢測(cè)抑菌活性、抗豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)活性、耐酸和耐膽鹽活性，篩選出具有綜合優(yōu)勢(shì)的益生菌菌株4株，并經(jīng)16S rRNA深入鑒定，它們分別為食淀粉乳酸桿菌（Lactobacillus amylovorus）、屎腸球菌（Enterococcus Faecium）和兩株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。在上述基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步應(yīng)用這4株益生菌菌株，提取各株胞外多

2、糖（Exopoly Saccharides，EPS）并檢測(cè)其抗TGEV活性，分析比較各株益生菌培養(yǎng)上清的抗病毒活性與其胞外多糖的相關(guān)性，為探究益生菌抗TGEV的成分提供理論依據(jù)。
　　在益生菌抑菌特性的檢測(cè)中，選用臨床上最常見的兩種病原菌:以大腸桿菌O78（Escherichia coli O78）為代表的革蘭氏陰性菌和以致病性金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)為代表的革蘭氏陽(yáng)性菌。采用牛津杯法（瓊脂擴(kuò)散法

3、）來(lái)篩選具有抑制致病菌的益生菌菌株，確保益生菌具有對(duì)抗兩株病原菌的特性。結(jié)果表明:50株益生菌均有不同程度的抑菌作用，對(duì)兩株不同致病菌也存在抑制作用的差異，同一株益生菌抑制大腸桿菌O78作用強(qiáng)，但對(duì)致病性金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表現(xiàn)為很強(qiáng)和/或很弱的抑制作用，缺乏規(guī)律性;不同益生菌菌株分別對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用差異性顯著(P＜0.05)，存在著菌株差異性。
　　在益生菌抗病毒特性的

4、檢測(cè)中，選用仔豬病毒性腹瀉常見病毒——豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)作為研究對(duì)象，以ST細(xì)胞建立體外TGEV感染細(xì)胞模型，采用MTT比色法檢測(cè)益生菌的抗TGEV活性。檢測(cè)結(jié)果表明:50株益生菌均對(duì)TGEV具有不同程度抑制作用，抑制程度不一;其中，具有顯著差異抗病毒活性的菌株為S1、S4、S32、S45(p＜0.05)。
　　為進(jìn)一步評(píng)價(jià)這50株益生菌培養(yǎng)上清和其中4株益生菌胞外多糖的抗病毒特性，運(yùn)用新城疫病毒的HA試驗(yàn)，檢測(cè)了對(duì)N

5、DV血凝特性的影響，結(jié)果表明:50株菌株中有13株菌株具有抗NDV血凝作用;S1和S4菌株的培養(yǎng)上清具有抗NDV血凝的作用，S32、S45、S15、S35跟生理鹽水和MRS對(duì)照組相比無(wú)差別，不具有抗NDV血凝的作用，上述菌株所提取的胞外多糖均不具有抗NDV血凝的作用。
　　為保證益生菌在胃腸道內(nèi)能夠存活、模擬胃腸道環(huán)境以及潛在的應(yīng)用價(jià)值，對(duì)具有綜合優(yōu)勢(shì)的菌株，選用pH2.0的MRS培養(yǎng)以及含0.3％豬膽鹽的MRS液體培養(yǎng)基分別處理

6、益生菌1h和4h，同時(shí)設(shè)置正常MRS培養(yǎng)基作為對(duì)照組，檢測(cè)益生菌的耐酸、耐膽鹽特性。最終篩選出4株具有耐酸耐膽鹽特性、抑制病原菌和抗病毒活性的益生菌:S1、S4、S32、S45。經(jīng)過(guò)16S rRNA鑒定，S1為食淀粉乳桿菌（Lactobacillus amylovorus），S4為屎腸球菌（Enterococcus Faecium），S32和S45為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。
　　對(duì)上述4株益生菌菌株分別