復(fù)合益生菌的分離鑒定及其發(fā)酵豆粕對固始雞生產(chǎn)應(yīng)用的研究.pdf

1、本研究從自然界中篩選出耐酸耐膽鹽的蠟樣芽孢桿菌和乳酸桿菌，與實驗室已分離鑒定的釀酒酵母和米曲霉按照5∶2∶3∶1（蠟樣芽孢:5×106/g，乳桿菌2×106/g，釀酒酵母:3×106/g，米曲霉:1×106/g）的比例復(fù)合，30℃72h發(fā)酵普通豆粕，并監(jiān)測72h發(fā)酵過程中常規(guī)指標和非常規(guī)指標的動態(tài)變化。而后分別用該復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕和普通豆粕制備的玉米-豆粕型日糧飼喂1日齡的固始蛋仔雞（母雞），飼養(yǎng)30天后比較發(fā)酵豆粕對固始蛋仔雞生長性

2、能、免疫功能、腸道發(fā)育、腸道群落數(shù)量和微生物區(qū)系穩(wěn)定性和糞便臭味改善的影響。
　　試驗一:耐酸耐膽鹽芽孢桿菌和乳酸桿菌的篩選及鑒定
　　從秸桿有機肥和土壤等自然環(huán)境中分離出耐高溫的芽孢桿菌和產(chǎn)酸的乳酸桿菌，經(jīng)過初篩和復(fù)篩選出耐酸耐膽鹽且產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶性能良好的芽孢桿菌和耐酸耐膽鹽的乳酸桿菌。通過16S rRNA擴增比對鑒定篩選的菌種，進而用MEGA4.0構(gòu)建系統(tǒng)進化樹進行分析。試驗成功的篩選出較為理想的芽孢桿菌和乳酸桿菌。

3、
　　試驗二:復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕過程中營養(yǎng)價值的動態(tài)監(jiān)測
　　對制備的蠟樣芽孢桿菌和乳酸桿菌儲備液進行平板計數(shù)，對釀酒酵母和米曲霉孢子液進行血細胞平板計數(shù)。按照一定比例（蠟樣芽孢5×106/g，乳桿菌2×106/g，釀酒酵母3×106/g，米曲霉1×106/g）添加到普通豆粕中，在濕度75％-90％，溫度30℃的環(huán)境中72h發(fā)酵，期間每隔8h在無菌環(huán)境中通風(fēng)換氣并采集樣品，檢測發(fā)酵過程中豆粕的常規(guī)指標和非常規(guī)指標的變化規(guī)律。

4、結(jié)果表明:1）豆粕發(fā)酵72h期間其水分含量均無顯著（P＞0.05）變化;2）粗灰分含量僅在發(fā)酵72h時顯著增大(P＜0.05);3)粗蛋白和酸溶蛋白含量顯著升高后維持在較高水平;4）活菌含量先是顯著(P＜0.05)降低，40h后卻呈現(xiàn)顯著升高（P＜0.05）;5)pH在發(fā)酵的8h時已經(jīng)顯著降低（P＜0.05）到5.48，而后都維持在較理想的低pH范圍內(nèi);6）豆粕發(fā)酵48小時后只有絲氨酸含量顯著增多（P＜0.05），發(fā)酵到72h后，除蛋氨

5、酸外其余各氨基酸均顯著增多（P＜0.05）;7）胰蛋白酶抑制因子持續(xù)穩(wěn)定降低（P＜0.05）;8）豆粕植酸含量在發(fā)酵過程先升高后降低(P＞0.05);9)蛋白酶活性在整個發(fā)酵過程中變化幅度較大;10）淀粉酶活性在發(fā)酵8h時顯著升高(P＜0.05)，而后維持在較高的水平;11）抗原蛋白的降解逐步加強但并不完全。
　　試驗三:復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕對固始雞生產(chǎn)應(yīng)用的研究
　　選取120只1日齡固始蛋仔雞，隨機分為兩個處理，分別飼喂復(fù)

6、合益生菌發(fā)酵豆粕和普通豆粕配置的玉米豆粕型日糧，每個處理4個重復(fù)，每隔10天測定其生長性能指標并采集新鮮糞樣;在試驗10d，20d，25d和30d時，每個處理選取4只固始雞，注射4mL5％的戊巴比妥鈉溶液處死，分離各腸道，無菌采集各腸道內(nèi)容物，并對各段腸道長度和重量進行測量;在試驗30d時，每個處理隨機選取4只固始雞進行翅靜脈血樣采集。結(jié)果表明:1）復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕顯著提高了固始雞試驗?zāi)┢隗w重(P＜0.05)和整個試驗期間的平均日增重

7、，也顯著提高了固始雞整個試驗期間的粗蛋白消化率(P＜0.05);2)復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕對固始雞各期免疫器官指數(shù)和末期血清IgG濃度（P＞0.05）均無明顯改善，但卻顯著提高了(P＜0.05)其空腸sIgA含量，同時也顯著提高了(P＜0.05)靜脈血白細胞中IL6，IL8和CD3+的相對表達量;3）復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕顯著增加了(P＜0.05)固始雞十二指腸的長度;4）復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕顯著提高了(P＜0.05)固始雞十二指腸乳酸桿菌和回腸

8、、盲腸腸球菌的群落數(shù)量，但同時提高了盲腸大腸桿菌群落數(shù)量。相同日齡，該發(fā)酵豆粕對前期十二指腸和空腸微生態(tài)的影響高于后期，且腸道菌落種類更趨于穩(wěn)定狀態(tài);對回腸微生態(tài)影響一直相對較小且其腸道菌落種類也趨穩(wěn)定;但對盲腸微生態(tài)的影響較大，在此腸道內(nèi)微生物種類相似性逐步降低到27.2％，穩(wěn)定性下降而日趨多樣性;5）復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕顯著降低了(P＜0.05)試驗全期雞糞中氮含量和試驗?zāi)┢陔u糞中糞臭素的含量，但是卻也顯著增加了(P＜0.05)其中吲