不同劑量UVA1輻射對硬皮病鼠模型的療效比較及對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能影響的初探.pdf

1、硬皮病是一種原因不明的、臨床上以局限性或彌漫性皮膚增厚和纖維化為特征的結(jié)締組織病，除皮膚受累外，也可影響內(nèi)臟、心、肺和消化道等器官。到目前為止，發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，臨床上也無特效的治療方法，早期治療的目的在于阻止新的皮膚和臟器受累，晚期治療的目的在于改善已有的癥狀。UVA1(340～400hm)光療法是近年來新發(fā)展的物理療法，對特應(yīng)性皮炎、硬皮病、蕈樣肉芽腫等多種皮膚病均有較好的療效，但其作用機(jī)制尚未完全明了，可能與其調(diào)節(jié)人體的免疫功

2、能、誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡有關(guān)。 第一章：硬皮病動(dòng)物模型的建立。目的：用博來霉素誘發(fā)建立相對穩(wěn)定的小鼠硬皮病動(dòng)物模型，為下一步實(shí)驗(yàn)做好準(zhǔn)備。方法：選用SPF級、雌性、6周齡、體質(zhì)量18～22 g的BALB/c小鼠20只，隨機(jī)分為造模組和對照組，每組各10只。造模組小鼠背部皮下注射100UL 400μg/ml的博來霉素，每日一次，共28天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后觀察并比較兩組小鼠的皮膚、組織病理、皮膚厚度和膠原含量的變化。結(jié)果：造模組小鼠注射部位皮膚

3、明顯增厚、彈性變?nèi)?、無毛發(fā)生長，對照組小鼠皮膚紅潤、表皮很薄、彈性佳，毛發(fā)亮而有光澤。造模組小鼠皮膚組織學(xué)顯示真皮層厚度增加，真皮上部膠原纖維明顯增多，膠原纖維束粗大、排列緊密、紅染，平均皮膚厚度10.68±2.29 μm；對照組小鼠皮膚組織學(xué)顯示皮膚較薄，膠原纖維較少，皮下組織疏松，平均皮膚厚度6.96±0.64μm，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.945，P<0.001)。造模組羥脯氨酸和膠原含量分別為5041.10±1720.9

4、2 μg/mg濕重、37606.61±12838.04μg/mg蛋白，對照組為2094.40±586.01μg/mg濕重、15624.22±4371.63 μg/mg蛋白，兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.712，P<0.01)。結(jié)論：博來霉素可以誘發(fā)并建立相對穩(wěn)定的硬皮病鼠模型。 第二章：不同劑量UVA1輻射對硬皮病鼠模型皮膚影響的實(shí)驗(yàn)研究。目的：比較不同劑量的UVA1輻射硬皮病鼠模型后皮膚厚度和膠原含量的變化，為臨床治療硬

5、皮病尋找合適的照射劑量。方法用100UL 400μg/ml的博來霉素皮下注射BALB/c小鼠背部，共28天，建立硬皮病的小鼠模型，然后將小鼠隨機(jī)分為空白對照組、模型對照組、UVA1照射組(大、中、小劑量)及陰性對照組。每周照射3次，共10周，觀察并比較各組小鼠皮膚組織病理改變、皮膚厚度和膠原含量的變化。結(jié)果：模型對照組與空白對照組相比，皮膚厚度(t=4.945，P<0.001)和膠原含量(t=3.712，P<0.01)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義。UVA1照射組小鼠皮膚變軟、變薄，但只有HD-UVA1組小鼠皮膚厚度、膠原含量與模型對照組、陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；照射組之間相互比較，皮膚厚度差異F=14.853，P<0.01，膠原含量差異F=6.317，P<0.01，尤其是HD-UVA1與MD-UVA1和LD-UVA1之間有顯著差異。結(jié)論：HD-UVA1照射能明顯改善博來霉素所致的硬皮病鼠模型的皮膚厚度、膠原含量的變化，可能與其抑制皮膚的膠原增生、降低

7、膠原含量有關(guān)。 第三章：不同劑量的UVA1輻射對硬皮病鼠模型血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響。目的：比較不同劑量的UVA1輻射對硬皮病鼠模型皮膚勻漿中CD34和M30的影響，初步探討UVA1光療對硬皮病血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)功能的影響。方法：用100UL400μg/ml的博來霉素皮下注射BALB/c小鼠背部，共28天，建立硬皮病的小鼠模型；然后將小鼠隨機(jī)分為模型對照組、UVAl照射組(大、中、小劑量)及陰性對照組，每周照射3次，共10周。治療

8、結(jié)束后比較各組小鼠皮膚勻漿中CD34和M30含量的變化。結(jié)果：①與造模組相比，CD34的變化僅有HD-UVA1組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.753，P<0.001)；M30的變化在所有UVA1照射組之間均有差異。②與陰性對照組相比，CD34的變化在LD-UVA1組并無明顯差異，MD-UVA1組和HD-UVA1組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；M30的變化僅有HD-UVA1組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.413，P<0.001)。③不同劑量的UVA1照射組之

9、間采用單因素方差分析，F(xiàn)=15.315，P<0.001，說明三組之間有差異；兩兩比較時(shí)(S-N-K)，HD-UVA1與MD-UVA1和LD-UVA1比較有顯著差異(P<0.05)。結(jié)論：UVA1光療法可以通過上調(diào)CD34，使血管生成增多：并抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡等調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，改善臨床癥狀，且其療效與照射強(qiáng)度、累積劑量有關(guān)，HD-UVA1的療效較LD-UVA1和MD-UVA1更加明顯。 第四章：UVA1輻射對人成纖維細(xì)

10、胞膠原代謝影響的研究。目的：比較不同劑量的UVA1輻射對人成纖維細(xì)胞增殖能力和膠原代謝的影響。方法：采用原代分散細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)，待其融合達(dá)90％以上時(shí)，制備成細(xì)胞懸液，以3×105個(gè)細(xì)胞/mL接種至96孔板和24孔板，細(xì)胞長成單層后分別予100J/cm2、60 J/cm2、20 J/cm2 UVA1照射，同時(shí)設(shè)空白對照組。照光后Oh、24h、48h在倒置顯微鏡下觀察成纖維細(xì)胞的形態(tài)變化、MTT法檢測細(xì)胞的增殖能力、消化法

11、測定細(xì)胞內(nèi)羥脯氨酸和膠原含量的變化。結(jié)果：UVA1照射組的細(xì)胞全部出現(xiàn)細(xì)胞間隙增寬、突起縮短、胞漿減少、細(xì)胞變圓、破碎等變化，以HD-UVA1組破壞最大。單一劑量的UVA1照射對細(xì)胞的增殖能力、羥脯氨酸及膠原含量均有明顯的抑制作用，與正常對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.001；這種抑制作用在24h最明顯，48h逐漸恢復(fù)。在相同的時(shí)間點(diǎn)，不同劑量的UVA1照射對細(xì)胞的增殖能力、羥脯氨酸及膠原含量的抑制作用呈劑量依賴性，劑量越大，抑制