維藥神香草總黃酮對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:維藥神香草總黃酮的大孔吸附樹脂純化工藝，使其含量達(dá)到50％以上;在哮喘大鼠模型的基礎(chǔ)上，觀察神香草總黃酮對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響，并探討其可能的作用機(jī)制，從而為神香草的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　(1)通過(guò)靜態(tài)吸附-洗脫試驗(yàn)，以總黃酮的吸附量和解吸量為指標(biāo)，比較11種不同型號(hào)大孔樹脂對(duì)神香草總黃酮的吸附和解吸性能，篩選最佳大孔樹脂型號(hào);采用單因素試驗(yàn)考察上樣濃度、上樣流速、樹脂徑高比、洗脫劑百分比

2、濃度及用量、洗脫流速等因素對(duì)最佳大孔樹脂的純化工藝的影響。
　　(2)采用卵白蛋白(OVA)注射霧化吸入法復(fù)制哮喘大鼠模型的基礎(chǔ)上，進(jìn)行藥物干預(yù)，通過(guò)BUXCO動(dòng)物肺功能測(cè)定儀觀察其對(duì)哮喘大鼠氣道高反應(yīng)性的影響;結(jié)合肺組織病理學(xué)的HE染色、Masson三色染色，觀察氣道炎癥和氣道重塑;計(jì)數(shù)各組大鼠BALF中的白細(xì)胞分類及EOS個(gè)數(shù);采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)大鼠肺組織及BALF中TGF-β1、嗜酸性粒細(xì)胞活化趨化因子

3、(Eotaxin-1)水平、血清中免疫球蛋白E(IgE)及肺組織中Ⅲ型膠原、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β1)的含量;采用TBA法測(cè)定MDA含量;用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活力。
　　結(jié)果:
　　(1) AB-8型大孔樹脂最適合用于神香草總黃酮的純化，其最佳純化工藝參數(shù)為上樣濃度為2.56mg/mL，上樣流速為4BV/h，樹脂徑高比為1∶5;吸附后先用5BV水洗滌樹脂，洗脫流速為5BV/h，水洗脫液棄去，用百分比濃度為70％的乙

4、醇/洗脫9BV，流速為4BV/h，收集洗脫液，濃縮，干燥，即得神香草總黃酮。此最佳純化工藝使神香草總黃酮純度達(dá)65.7％。
　　(2)肺功能實(shí)驗(yàn)中模型組呼吸頻率(F)相對(duì)于正常組顯著增高(P＜0.01)，每分種通氣量(MVb)、吸氣流量峰值(PIFb)、呼氣流量峰值(PEFb)顯著減小(P＜0.05或P＜0.01)，吸氣時(shí)間(Ti)、呼氣時(shí)間(Te)沒有顯著性差異(P＞0.05);與模型組比較，神香草總黃酮中、高劑量組及地塞米松組

5、可降低哮喘大鼠F(P＜0.05或P＜0.01)，升高M(jìn)VB、PIFB和PEFB(P＜0.05)，但對(duì)Ti、Te沒有顯著影響（P＞0.05）;與模型組相比，神香草總黃酮各劑量組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、Ly、Eos、Neu的百分比，血清IgE及肺組織Eotaxin含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);高、中劑量組能夠改善氣道炎癥;與模型組相比，神香草總黃酮各劑量組大鼠肺組織Ⅲ型膠原(ColⅢ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)含量降

6、低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);高、中劑量組能夠改善或減緩氣道重塑;結(jié)果表明，神香草總黃酮不同劑量均增高M(jìn)DA、SOD含量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，并呈劑量依賴性。
　　結(jié)論:本研究?jī)?yōu)選的維藥神香草總黃酮的AB-8大孔吸附樹脂純化工藝穩(wěn)定、可行，符合中藥5類新藥研制要求。神香草總黃酮能夠改善氣道高反應(yīng)性、大鼠肺功能，抑制氣道炎癥，減緩氣道重塑，其作用機(jī)制可能抑制EOS等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及降低哮喘大鼠Eotaxin-1