七氟醚對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響及機(jī)制探討.pdf

1、1.研究背景：
　　哮喘是以炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道重塑為主要病理生理特點(diǎn)的慢性氣道炎癥性疾患。哮喘的發(fā)病受遺傳易感性和環(huán)境因素的共同影響。近年來，有關(guān)哮喘發(fā)病機(jī)制的研究取得了很大的進(jìn)展。哮喘的治療手段在不斷的進(jìn)步，治療水平也不斷提升。但是，隨著環(huán)境污染的不斷加劇，哮喘的發(fā)病率和病死率卻呈現(xiàn)不斷上升的趨勢。同時，伴隨著哮喘發(fā)病率的不斷升高，在手術(shù)病人中哮喘患者所占的比例也相應(yīng)地增多。
　　七氟醚是臨床麻醉工作中最常用的吸入麻

2、醉劑之一。近幾年，國內(nèi)外均有病例報道，七氟醚能成功地用于常規(guī)治療藥物無效的重癥哮喘患者，尤其是嬰幼兒重癥哮喘持續(xù)狀態(tài)。大量的臨床和動物實驗表明，七氟醚能舒張支氣管平滑肌，緩解支氣管痙攣，抑制哮喘個體的氣道高反應(yīng)性，降低哮喘個體的氣道阻力。但是，七氟醚治療重癥哮喘、抑制哮喘氣道反應(yīng)性、降低氣道阻力的具體機(jī)制并不清楚。哮喘氣道的高反應(yīng)性及哮喘持續(xù)狀態(tài)與哮喘氣道炎癥和氣道重塑密切相關(guān)。然而，有關(guān)七氟醚對哮喘氣道炎癥和氣道重塑方面的研究極少見有

3、報道。
　　本研究擬以O(shè)VA（卵清蛋白）誘導(dǎo)的急/慢性哮喘小鼠為研究對象，實驗分為兩個部分，分別觀察七氟醚對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響，并初步探討其可能的分子機(jī)制。
　　2.研究目的：
　　以O(shè)VA致敏和激發(fā)的急、慢性哮喘小鼠模型為研究對象，觀察七氟醚對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響。期望為哮喘患者臨床麻醉的管理和麻醉藥物的選擇提供一定的實驗室理論依據(jù)。
　　3.研究方法：
　　3.1、急、慢性哮喘

4、模型的建立
　　C57BL/6雌性小鼠，隨機(jī)分為：對照組（生理鹽水組/ Con組），哮喘模型組（OVA致敏和激發(fā)組/OVA組），七氟醚干預(yù)組（OVA致敏、激發(fā)合并七氟醚處理組/OVASVF組），氧氣對照組（OVA致敏、激發(fā)合并氧氣處理組/OVAO2組）。腹腔注射OVA和kAlSO4混合液進(jìn)行致敏，根據(jù)急慢性造模需求的不同進(jìn)行OVA霧化激發(fā)。
　　3.2、七氟醚對哮喘小鼠的干預(yù)
　　每次OVA霧化激發(fā)前，3％七氟醚吸入處

5、理七氟醚干預(yù)組小鼠1小時。
　　3.3、組織病理學(xué)檢測
　　觀察七氟醚對哮喘小鼠肺組織病理學(xué)的影響：包括急性氣道炎癥和慢性氣道重塑。
　　3.4、分子生物學(xué)檢測
　　ELISA、免疫印跡、免疫組織化學(xué)方法分別檢測七氟醚對哮喘小鼠肺泡灌洗液炎癥因子、炎癥相關(guān)蛋白、氣道重塑相關(guān)指標(biāo)表達(dá)的影響。
　　3.5、統(tǒng)計學(xué)分析
　　統(tǒng)計分析使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件；用one-way ANOVA檢測組間差異，用B

6、onferroni檢驗進(jìn)行兩兩間比較；所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示; P＜0.05表示差異有顯著性。
　　4.研究結(jié)果：
　　4.1、七氟醚對急性哮喘模型小鼠氣道炎癥的影響
　　與Con組相比，OVA組小鼠BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù)均顯著增多,TNF-α的含量升高,IL-10與TNF-α比例顯著增加(P<0.01)，肺組織炎癥細(xì)胞浸潤、氣道上皮增生和粘液分泌明顯增加(P<0.01)；與OVA組相比，OVASVF

7、組小鼠BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù)均顯著減少，TNF-α的含量降低，IL-10與TNF-α比例降低，肺組織炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少，而OVAO2組小鼠在上述方面均無顯著變化。
　　與Con組相比，OVA組小鼠肺泡灌洗液、肺組織HMGB1含量及細(xì)胞漿內(nèi)HMGB1表達(dá)均明顯升高，肺組織中TLR2表達(dá)增多；與OVA組相比，OVASVF組HMGB1、TLR2表達(dá)顯著下降(P<0.01),而OVAO2組小鼠則無上述變化。
　　4.2、

8、七氟醚對慢性哮喘模型小鼠氣道重塑的影響
　　與Con組相比，OVA組小鼠肺組織支氣管周圍、血管周圍及肺間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤明顯增多，氣道壁增厚、平滑肌增生、膠原纖維增生及沉積均明顯增多；與OVA組相比，OVASVF組小鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少，氣道壁增厚、平滑肌增生、膠原纖維增生及沉積均減少，而OVAO2組小鼠則無上述明顯變化。
　　與Con組相比，OVA組小鼠肺組織中α-SMA、TGF-β、和VEGF的表達(dá)增多(P<0.0

9、1)；與OVA組相比，OVASVF組α-SMA、TGF-β、和VEGF的表達(dá)減少(P<0.01)，而OVAO2組小鼠則無變化。
　　5.研究結(jié)論：
　　5.1、七氟醚可以抑制急性哮喘模型小鼠的氣道炎癥，其抑制炎癥的作用可能與抑制哮喘小鼠肺組織HMGB1的胞漿表達(dá)和TLR2的蛋白表達(dá)相關(guān)；
　　5.2、七氟醚可以抑制慢性哮喘模型小鼠的氣道重塑，其抑制氣道重塑的作用可能與降低哮喘小鼠肺組織TGF-β和VEGF的蛋白表達(dá)水平