孕期-哺乳期砷暴露對(duì)仔鼠腦組織Sema3a表達(dá)影響.pdf

1、背景：目前環(huán)境砷污染已經(jīng)成為一個(gè)日益突出的健康問(wèn)題，慢性砷及其化合物暴露可導(dǎo)致砷在體內(nèi)蓄積，從而引起多系統(tǒng)損傷。大量流行病學(xué)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，慢性砷暴露對(duì)人類(lèi)及動(dòng)物具有神經(jīng)毒性作用，尤其在胎兒出生前后及發(fā)育階段對(duì)砷的神經(jīng)毒性更為敏感。因此，孕期/哺乳期低水平砷暴露所致神經(jīng)系統(tǒng)損傷及其機(jī)制研究，已成為當(dāng)今各國(guó)學(xué)者關(guān)注的一個(gè)熱點(diǎn)。
　　 學(xué)習(xí)和記憶是神經(jīng)系統(tǒng)所具有的重要功能之一。目前，已有許多學(xué)者證明了突觸可塑性與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)。突

2、觸可塑性分為功能可塑性和結(jié)構(gòu)可塑性，其中突觸結(jié)構(gòu)可塑性的建立必須通過(guò)軸突末端生長(zhǎng)錐來(lái)實(shí)現(xiàn)。有研究表明發(fā)育期砷暴露可影響軸突的生長(zhǎng)，而sema3a作為軸突導(dǎo)向因子對(duì)軸突的正常生長(zhǎng)起重要調(diào)控作用。由此，孕期/哺乳期砷暴露是否影響Sema3a表達(dá)引起我們的關(guān)注。
　　 目的：觀(guān)察砷對(duì)仔鼠發(fā)育時(shí)期腦組織中軸突導(dǎo)向因子sema3a在基因和蛋白水平表達(dá)的影響，為闡明腦發(fā)育期砷暴露對(duì)學(xué)習(xí)記憶影響的毒作用機(jī)制提供靶基因依據(jù)。
　　 方法

3、：昆明孕小鼠按體重隨機(jī)分為飲用水對(duì)照組、1ppmAs2O3染毒組、4ppmAs2O3染毒組、16ppmAs2O3染毒組，每組6只，從孕0天起孕期和哺乳期對(duì)母鼠連續(xù)染毒，產(chǎn)后3周停止哺乳。于仔鼠出生后第21天分批脫頸處死，留取腦組織，置于-80℃冷凍固化。行為學(xué)試驗(yàn)測(cè)試孕期砷暴露至產(chǎn)后21天小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。基因芯片技術(shù)篩選仔鼠腦發(fā)育相關(guān)基因，用PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠腦組織軸突導(dǎo)向因子sema3a在mRNA水平的表達(dá)，用Westernblo

4、t方法檢測(cè)sema3a蛋白表達(dá)。用免疫組化方法檢測(cè)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白（neuronalgrowthassociatedprotein，GAP43）在生長(zhǎng)錐細(xì)胞膜的表達(dá)分布。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，用單因素方差分析(ANOVA)，比較各染砷組與對(duì)照組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，兩組間比較用LSD法分析，以P＜0.05表示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。
　　 結(jié)果：跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著染毒劑量的增加，仔鼠從平臺(tái)跳下的潛伏期縮短，發(fā)生錯(cuò)誤次數(shù)增加?；蛐酒Y

5、選出與腦發(fā)育相關(guān)的基因sema3a、RhoA、Rock1、Rock2、cRMPs的表達(dá)顯著上調(diào)。Real-timeRT-PCR、Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，出生21天仔鼠腦組織Sema3a在基因和蛋白水平的表達(dá)在染砷組顯著升高，且呈劑量-反應(yīng)關(guān)系(p＜0.05)。免疫組化結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，砷暴露組GAP43表達(dá)顯著降低，且呈現(xiàn)明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系。
　　 結(jié)論：孕期/哺乳期砷暴露影響仔鼠學(xué)習(xí)記憶功能，上調(diào)仔鼠腦組織S