孕期酒精暴露對仔鼠視網(wǎng)膜發(fā)育及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、當(dāng)孕婦在妊娠期濫用酒精時，由于酒精可隨血液通過胎盤屏障，除了容易導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎外，還可給胎兒在出生后造成一些不可逆的影響，導(dǎo)致各種生長障礙、面部畸形，尤其是對神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育危害最大，造成胎兒酒精綜合癥(Fetalalcoholsyndrome，F(xiàn)AS)。在FAS中常出現(xiàn)斜眼、小眼畸形、先天性近視、弱視等一些視覺系統(tǒng)的疾病，而這些疾病的發(fā)生大多數(shù)與視網(wǎng)膜的異常有關(guān)。本課題運用C5B/6J小鼠建立妊娠期酒精暴露動物模型，以模擬胎兒酒精綜合征

2、的發(fā)生，來研究孕期酒精暴露對小鼠視網(wǎng)膜致畸、細(xì)胞發(fā)育及凋亡等方面的影響，旨在為酒精所致的視覺系統(tǒng)疾病提供病因?qū)W研究的理論基礎(chǔ)。
　　 目的：研究視網(wǎng)膜的正常發(fā)育和細(xì)胞分化過程，和酒精對視網(wǎng)膜細(xì)胞發(fā)育和凋亡方面的影響以及對視網(wǎng)膜的致畸作用。
　　 方法：利用C57BL/6J小鼠建立孕期酒精暴露模型，用HE染色和免疫熒光技術(shù)，選取P0、P7、P14和P30仔鼠觀察視網(wǎng)膜的正常發(fā)育和細(xì)胞分化過程，和酒精對視網(wǎng)膜細(xì)胞在發(fā)育和凋亡

3、方面的影響，以及酒精的對視網(wǎng)膜的致畸作用。
　　 結(jié)果：1、視網(wǎng)膜的一般結(jié)構(gòu)的發(fā)育：視網(wǎng)膜片層化形成以及水平細(xì)胞和雙極細(xì)胞的發(fā)育：
　　 (1)視網(wǎng)膜片層化過程：
　　 小鼠剛出生即P0時視網(wǎng)膜僅分化出四層，包括神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)網(wǎng)層、成神經(jīng)母細(xì)胞層和色素上皮層：P7時在成神經(jīng)母細(xì)胞層中間出現(xiàn)外網(wǎng)層，將其分為內(nèi)顆粒層、外顆粒層，此后外網(wǎng)層增寬，視錐視桿層出現(xiàn)，至P14小鼠睜眼時，視網(wǎng)膜十層結(jié)構(gòu)基本形成。表明視網(wǎng)膜形

4、態(tài)學(xué)的發(fā)育程度與其功能上的完善程度有一致性。
　　 (2)水平細(xì)胞和雙極細(xì)胞的發(fā)育：
　　 本研究中選取Doublecortin、PKC-α來分別標(biāo)記水平細(xì)胞和雙極細(xì)胞。①水平細(xì)胞的發(fā)育：Doublecortin陽性細(xì)胞在P0時已經(jīng)出現(xiàn)，位于成神經(jīng)母細(xì)胞層內(nèi)靠近色素上皮層的位置，然后向下集聚，到P7時，Doublecortin陽性細(xì)胞到達目標(biāo)層，樹突伸入外網(wǎng)層，和胞體共同呈現(xiàn)出“丁”字形結(jié)構(gòu)，此后，伸入外網(wǎng)層的樹突數(shù)量逐

5、漸增多，直至P14時樹突和胞體共同呈現(xiàn)出扇形結(jié)構(gòu)，至此水平細(xì)胞發(fā)育基本完成；②雙極細(xì)胞的發(fā)育：-P0時，未出現(xiàn)PKC-α陽性細(xì)胞；P7時，陽性細(xì)胞出現(xiàn)，胞體多層排列位于內(nèi)核層中緊鄰?fù)饩W(wǎng)層的位置，軸突同節(jié)細(xì)胞建立聯(lián)系，但伸入外網(wǎng)層中的樹突叢不明顯，此后PKC-α陽性細(xì)胞數(shù)逐漸增多，到P14時，PKC-α陽性細(xì)胞變?yōu)閱螌泳o密排列，軸突密度增加，外網(wǎng)層中可見大量樹突叢，此時呈現(xiàn)出典型的雙極細(xì)胞形態(tài)。
　　 2、酒精暴露對視網(wǎng)膜片層化及

6、水平細(xì)胞和雙極細(xì)胞發(fā)育的影響：
　　 (1)酒精暴露對視網(wǎng)膜片層化的影響：
　　 在本研究中，通過和對照組作對比，我們發(fā)現(xiàn)胎兒期酒精暴露的小鼠在出生后視網(wǎng)膜出現(xiàn)片層化延遲和增厚現(xiàn)象，且具有劑量依賴性和長時程效應(yīng)。
　　 (2)酒精暴露對水平細(xì)胞和雙極細(xì)胞發(fā)育的影響：
　　 在各年齡點中，酒精組的小鼠視網(wǎng)膜水平細(xì)胞和雙極細(xì)胞的數(shù)量均減少，具有劑量依賴性和長時程效應(yīng)；此外，酒精組水平細(xì)胞出現(xiàn)極性紊亂，具有劑量

7、依賴性。
　　 3、酒精暴露對視網(wǎng)膜的致畸作用和胞凋亡的影響：
　　 通過對P0各劑量組內(nèi)視網(wǎng)膜做HE染色觀察發(fā)現(xiàn)，對照組及低劑量組中未出現(xiàn)畸形視網(wǎng)膜，而高劑量組中畸形率為16％，畸形主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜細(xì)胞增殖，致使視網(wǎng)膜增厚加長發(fā)生折疊現(xiàn)象。另外，在本實驗中，用激活的easpase-3、easpase-8、caspase-9、TUNEL來標(biāo)記凋亡細(xì)胞。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理后結(jié)果顯示：在生理情況下，視網(wǎng)膜中節(jié)細(xì)胞及內(nèi)顆粒層的細(xì)胞是