線粒體外膜轉(zhuǎn)位因子Tom40在大腸桿菌中的表達(dá)和重新折疊的研究.pdf

1、線粒體內(nèi)含有1000-1500種蛋白質(zhì)，除參與氧化磷酸化的13種多肽外，98％以上的蛋白質(zhì)都是由細(xì)胞核基因編碼，經(jīng)轉(zhuǎn)錄、翻譯并在細(xì)胞質(zhì)核糖體中以前體形式合成后，再轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入線粒體的。研究表明，在線粒體內(nèi)膜和外膜上存在一系列涉及蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白質(zhì)復(fù)合物，稱為轉(zhuǎn)位因子(translocatior，又稱為translocase)，主要包括外膜的TOM復(fù)合體和SAM復(fù)合體，內(nèi)膜的TIM23復(fù)合體、TIM22復(fù)合體和OXAI復(fù)合體，它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)上都由

2、受體和供蛋白質(zhì)通過(guò)的孔道兩部分構(gòu)成。其中TOM轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體是線粒體蛋白進(jìn)入線粒體的第一道屏障，當(dāng)前體蛋白由細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)移向線粒體表面時(shí)，TOM復(fù)合體就會(huì)對(duì)其進(jìn)行識(shí)別及轉(zhuǎn)運(yùn)，根據(jù)前體蛋白的識(shí)別情況，前體蛋白分為三種類型：(1)無(wú)前序列，Tom70依賴的前體蛋白；(2)含前序列，Tom70依賴的前體蛋白；(3)含前序列，非Tom70依賴的前體蛋白。
　　 Tom40蛋白是TOM轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體的核心組分，它與受體蛋白Tom22及小Tom蛋白，

3、Tom5、Tom6、Tom7穩(wěn)定結(jié)合，共同形成400kDa的整體輸入孔道——GIP復(fù)合體(General Import Pore)。對(duì)線粒體蛋白通過(guò)TOM復(fù)合體的轉(zhuǎn)運(yùn)起著至關(guān)重要的作用。盡管近年來(lái)人們對(duì)TOM復(fù)合體及其亞基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能進(jìn)行了大量的研究，然而由于其核心亞基Tom40的三維空間結(jié)構(gòu)尚未解析出來(lái)，其轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的機(jī)理尚不清楚。在本研究中，我們嘗試用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)大量的表達(dá)大鼠Tom40蛋白(rTom40)，發(fā)現(xiàn)該蛋白以包涵體的