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文檔簡(jiǎn)介
1、TEV蛋白酶（tobacco etch virus protease）是煙草蝕斑病毒編碼的NIa蛋白中27 KD的催化區(qū)域。由于它能特異性識(shí)別含有6個(gè)氨基酸(ENLYFQ)特定序列的蛋白，并進(jìn)行酶切，酶切活性較高，且酶切的條件具有寬容性。因此在重組蛋白領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛。
本實(shí)驗(yàn)室依據(jù)大腸桿菌偏愛(ài)密碼子和TEV的基因序列，通過(guò)重疊PCR的方法成功克隆了TEV基因。目前對(duì)TEV酶的研究主要集中在通過(guò)不同的方法提高TEV酶的表達(dá)量、精
2、確的活性分析以及對(duì)TEV酶進(jìn)行固定化，其中對(duì)于TEV酶的活性檢測(cè)大部分是通過(guò)半定量進(jìn)行分析，即通過(guò)酶切后蛋白的SDS-PAGE上條帶的大小和結(jié)合蛋白濃度分析軟件進(jìn)行分析。
本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建 pET28b-MBP-his-TEV、 pET28b-MBP-his-ACP-TEV、pET28b-MBP-ybbR-his-TEV重組載體，成功表達(dá)和純化出目的蛋白，并且通過(guò)酶活分析發(fā)現(xiàn)ACP蛋白和ybbR短肽對(duì)TEV酶的活性有促進(jìn)作用，其
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