產(chǎn)腸毒素大腸桿菌987P菌毛FasA亞單位的原核表達(dá)、純化及免疫原性分析.pdf

1、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia Coli，ETEC)是引發(fā)仔豬、牛犢、羔羊等農(nóng)場(chǎng)家畜(禽)水樣腹瀉的最主要致病菌之一，其高發(fā)病率和致死率給畜牧養(yǎng)殖業(yè)造成很大經(jīng)濟(jì)損失[1]。ETEC的致病機(jī)理與其兩種保護(hù)性抗原密切相關(guān)：腸毒素(enterotoxins)和粘附素(adhesins)，腸毒素有耐熱型(heat-stable)和不耐熱型(heat-labile)兩種，粘附素，也稱為菌毛(pili)，介

2、導(dǎo)ETEC粘附于家畜小腸粘膜上皮細(xì)胞微絨毛上，菌毛有多種血清型，最常見的有K88、K99、987P、F41等，而987P+ETEC是仔豬腹瀉的主要病原菌之一。
　　本研究將987P+ETEC菌毛FasA亞單位的基因fasA構(gòu)建到原核表達(dá)載體上，表達(dá)FasA亞單位，經(jīng)親和層析獲得純化的FasA亞單位，免疫小鼠，分析其免疫原性，為研制以雙歧桿菌為表達(dá)載體的新型ETEC細(xì)菌載體活疫苗做基礎(chǔ)研究。
　　第一部分：PCR擴(kuò)增987P+

3、ETEC的fasA基因，連接到原核表達(dá)載體pQE-30上，構(gòu)建重組原核表達(dá)載體pQE-30-fasA，轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)菌E.coliM15，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)FasA亞單位，SDS-PAG電泳確定蛋白的表達(dá)形式、條件和效率。用Ni-Agarose His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒分離純化蛋白，透析復(fù)性濃縮后，于-70℃冰箱保存。
　　第二部分：用純化后的FasA亞單位免疫BALB/c小鼠，制備抗FasA的抗血清，用ELISA法檢測(cè)抗血清效價(jià)