胸膜肺炎放線桿菌IV型菌毛亞單位ApfA基因的表達(dá)及其免疫原性分析.pdf

1、　　豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌所引起的一種以胸膜肺炎和出血性壞死性肺炎為主要特征的呼吸道傳染病。最近，人們?cè)谛啬し窝追啪€桿菌中發(fā)現(xiàn)了菌毛，研究表明該菌毛屬于Ⅳ型A組菌毛家族。粘附通常被認(rèn)為是APP在宿主上皮細(xì)胞定居的第一步，有報(bào)道指出：除脂多糖外，一些其它的粘附素也可使胸膜肺炎放線桿菌粘附于粘膜表面。根據(jù)對(duì)菌毛特性及功能的研究，人們推測(cè)所謂的“其它粘附素”很可能就是菌毛。菌毛主要由菌毛蛋白構(gòu)成，有很強(qiáng)的抗原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生相

2、應(yīng)的抗體。菌毛亞單位基因apfA在12個(gè)典型的胸膜肺炎放線桿菌血清型中均有存在，且每個(gè)血清型菌株apfA的ORF長(zhǎng)度均為444bp,其同源性則高達(dá)98％以上，證明apfA是高度保守的。因此根據(jù)apfA的以上性質(zhì)，可以設(shè)想加入了菌毛的APP疫苗不僅能提供對(duì)同型菌株感染的保護(hù)，而且還可能提供對(duì)異型菌株感染的交叉保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)參照GenBank中豬胸膜肺炎放線桿菌血清型7型apfA3’末端444bp的特異片段序列設(shè)計(jì)引物，以豬胸膜肺炎放線桿

3、菌血清型7型25-4菌株基因組DNA為模板，擴(kuò)增apfA特異性基因片段。序列分析結(jié)果表明：25-4菌株與標(biāo)準(zhǔn)7型apfA基因同源性達(dá)98.6％。將apfA片段按正確的閱讀框架克隆入pGEX-6P-1載體中，用IPTG誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)其在大腸桿菌中的表達(dá)。經(jīng)SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示，表達(dá)的融合蛋白約為42kDa，以包涵體的形式存在。Westernblotting檢測(cè)其結(jié)果表明，GST-ApfA融合蛋白具有較強(qiáng)的免疫活性。在經(jīng)過變性、復(fù)性及純化