雞致病性大腸桿菌菌毛免疫原性及其FimA和FimH基因的研究.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文雞致病性大腸桿菌菌毛免疫原性及其FimA和FimH基因的研究姓名：隋兆峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：趙宏坤范偉興2003.6.1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要從山東省分離到了107株雞太腸桿菌，攻毒試驗(yàn)后，對(duì)其中16株高致病性大腸桿菌進(jìn)行了血清型鑒定，主要血清型為078。通過血凝試驗(yàn)及PCR鑒定得知，這16株大腸桿菌主要表達(dá)I型菌毛。菌毛的表達(dá)受許多因素的影響，本研究從培養(yǎng)時(shí)間，培養(yǎng)方式等條件對(duì)菌毛

2、表達(dá)的影響進(jìn)行了探索，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：培養(yǎng)72小時(shí)，菌毛可良好表達(dá)，振搖培養(yǎng)優(yōu)于靜止培養(yǎng)。菌毛提取方法的研究結(jié)果表明，保溫法優(yōu)于攪拌法。提取的菌毛蛋白經(jīng)SDS—PAGE測(cè)得其分子量約為17KDa。f選擇3株表達(dá)I型菌毛的優(yōu)勢(shì)致病血清型雞大腸桿菌作為試驗(yàn)株，分NYg“yx(024)、QD5(078)、QD2(02)。經(jīng)增菌培養(yǎng)后提取菌毛制備成單價(jià)和多價(jià)2種菌毛油乳苗。分別于1日齡免疫一次和1日齡、14日齡免疫二次對(duì)雞只進(jìn)行免疫試驗(yàn)，并于4周

3、齡攻毒。結(jié)果表明：用血清型O，s(QD5)制備的單價(jià)菌毛亞單位油乳苗能夠有效保護(hù)其同源菌株的攻擊，且接種免疫兩次的效果明顯優(yōu)于一次免疫。交叉保護(hù)試驗(yàn)表明QD5(078)、QD9(02)和JX(024)之間存在著一定的交叉保護(hù)作用。多價(jià)菌毛亞單位油乳苗免疫試驗(yàn)結(jié)果表明，由QD5(078)、QD9(02)和Ⅸ(024)菌株提取的菌毛制成的多價(jià)菌毛亞單位油乳苗能有效保護(hù)雞分別抵抗3種同源菌株經(jīng)氣囊的攻擊。參照Genbank收錄的禽源大腸桿菌I

4、型菌毛FimA基因序列，應(yīng)用DNAStar軟件分析，在其保守區(qū)設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物。以煮沸法提取的16株雞大腸桿菌基因組DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。16個(gè)分離株中有14株(除QD6與FN外)擴(kuò)增出特異的目的片段。選擇其中2株(QD5與JX)的PCR產(chǎn)物進(jìn)行了克隆和序列測(cè)定，并用DNAStar等軟件分析測(cè)序結(jié)果，證明所擴(kuò)增的產(chǎn)物為FimA片段，其核苷酸序列同源性較高，為998％。分析抗原性圖譜發(fā)現(xiàn)，二者的抗原峰圖基本相同，抗原變異主要集