產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗的制備及其免疫效果的評價(jià).pdf

1、犢牛腹瀉是指犢牛在出生7h到12d內(nèi)所發(fā)生的一種急性腹瀉，一般由腸道內(nèi)細(xì)菌、病毒、寄生蟲等傳染性因素或者營養(yǎng)不良、飼養(yǎng)環(huán)境惡劣等非傳染性因素造成，嚴(yán)重時(shí)會(huì)引發(fā)脫水，造成犢牛大量死亡。犢牛腹瀉是全球奶牛、肉牛養(yǎng)殖過程中最常見的問題，往往帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重制約著養(yǎng)牛行業(yè)的發(fā)展。在各種導(dǎo)致犢牛腹瀉的因素中，產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)是最主要的病原菌，也是牛發(fā)生腸毒血癥的病原菌之一。目前，多通過接種疫苗來預(yù)防此疾病的發(fā)生。然而，由于大腸

2、桿菌血清型繁多，且不同區(qū)域流行情況不同，一些商品化疫苗往往不能得到很好的免疫效果，因此，新疫苗的研發(fā)一直是預(yù)防該病的重點(diǎn)。
　　菌影是近年來的一種新型疫苗。它是通過基因滅活的方式將細(xì)菌變成一種無胞質(zhì)內(nèi)容物，但保留完整的細(xì)菌菌體及外膜上各種抗原結(jié)構(gòu)的無活性空胞體。由于菌影疫苗的免疫原性高，制備簡單，保存運(yùn)輸方便，同時(shí)還具有免疫佐劑性質(zhì)，能夠增強(qiáng)免疫應(yīng)答等諸多優(yōu)點(diǎn)，使其成為國內(nèi)外研究人員的研究熱點(diǎn)。
　　本研究以黑龍江部分牧場死

3、亡腹瀉犢牛的病料為研究材料，從中分離出致病性大腸桿菌，并對其所攜帶的毒力因子進(jìn)行檢測，并對致病性大腸桿菌進(jìn)行分型。結(jié)果顯示，該地區(qū)致犢牛腹瀉的主要大腸桿菌病原型為產(chǎn)腸毒素大腸桿菌。在此基礎(chǔ)上，我們篩選出一株疫苗候選菌株，制備成產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗。
　　通過動(dòng)物試驗(yàn)對產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗的免疫效果進(jìn)行檢測。將30只小鼠隨機(jī)分為三組，每組10只:菌影疫苗組、滅活疫苗組和對照組。疫苗的接種方式為腹腔注射，免疫劑量為1×108

4、CFU，每兩周免疫一次，共免疫三次。每次免疫一周后采取血清，利用間接ELISA方法檢測免疫小鼠血清抗體水平。疫苗三免一周后對免疫小鼠進(jìn)行腹腔攻毒，觀察并記錄攻毒一周內(nèi)小鼠的死亡情況。通過疫苗對小鼠的保護(hù)率以及小鼠抗體水平的檢測評價(jià)疫苗的免疫效果。結(jié)果表明，菌影疫苗對感染小鼠有較高的保護(hù)率，且能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的抗體水平。
　　綜合本研究結(jié)果表明，產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗具有良好的安全性，并具有很好的免疫原性，可激發(fā)動(dòng)物體產(chǎn)生較好的免