賴氨酸乙?；{(diào)節(jié)大腸桿菌NhoA蛋白活性的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)的賴氨酸乙?；菑募毦秸婧松锒计毡榇嬖诘囊环N翻譯后修飾。幾十年來，研究者們發(fā)現(xiàn)賴氨酸乙?；谡婧松锛毎邪l(fā)揮著許許多多的生物學功能。近幾年，在細菌和古生菌中，也發(fā)現(xiàn)了這種翻譯后修飾的廣泛存在。盡管如此，其在原核細胞中的分布范圍仍然不太清楚，這點也成為了開展原核系統(tǒng)中賴氨酸乙?；揎椆δ苎芯康恼系K。
　　 蛋白質(zhì)的賴氨酸乙?；且环N可逆的修飾，主要由蛋白質(zhì)乙酰轉(zhuǎn)移酶和去乙?；缚刂啤Ｔ诩毦?，研究最多的去乙酰化酶是與酵

2、母中沉默信息調(diào)節(jié)蛋白Sir2同源的CobB蛋白。雖然近幾年來有關(guān)CobB蛋白的功能研究取得了一些進展，但其底物和在細菌中的功能仍然不清楚。
　　 首先，我們使用蛋白質(zhì)組芯片技術(shù)篩選到了十五種具有賴氨酸乙?；揎椀牡鞍踪|(zhì)，其中的九種可以被大腸桿菌CobB催化去乙?；?，包括N-羥基芳香胺O-乙酰轉(zhuǎn)移酶(NhoA)。我們使用Western blot驗證了NhoA的確可以被CobB去乙?；?，并結(jié)合質(zhì)譜分析技術(shù)鑒定出NhoA中三個具有可逆

3、的乙?；揎椀馁嚢彼釟埢?。定點突變試驗顯示了其中兩個乙?；嚢彼岬耐蛔儠е翹hoA乙?；降慕档?。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，NhoA的N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(NAT)活性和O-乙酰轉(zhuǎn)移酶(OAT)活性都會受到這兩個乙?；嚢彼釟埢蛔兊挠绊?。并且，得到了直接的數(shù)據(jù)，證實CobB對NhoA的去乙?；饔锰岣吡薔hoA在體外的NAT活性。為了進一步闡明體內(nèi)的賴氨酸乙?；揎棇hoA活性的影響，我們對比了cobB基因敲除菌株與野生型菌株NhoA蛋白的乙

4、?；?，以及對硝基芳香族化合物的誘變敏感性。結(jié)果顯示，cobB基因的敲除會導致NhoA乙?；降奶岣吆蚈AT活性的降低。這些結(jié)果說明，可逆的賴氨酸乙?；揎椩隗w外和體內(nèi)條件下都能夠調(diào)節(jié)NhoA的活性。并且，CobB在體外可以通過催化NhoA的去乙?；岣咂銷AT活性，在體內(nèi)，也很可能是通過相同的方式調(diào)節(jié)NhoA的OAT活性。
　　 綜上所述，本研究中我們鑒定到了新的賴氨酸乙?；揎椀牡鞍踪|(zhì)和去乙?；窩obB的底物，發(fā)現(xiàn)了賴