乙?；鞍椎蔫b定研究.pdf

1、乙?；且环N可逆且高度調(diào)控的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,主要發(fā)生于蛋白質(zhì)賴氨酸殘基的ε-NH2位,它調(diào)控細(xì)胞凋亡、亞細(xì)胞的定位、DNA和蛋白質(zhì)相互作用、DNA復(fù)制和修復(fù)、DNA轉(zhuǎn)錄的活性及蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性等蛋白質(zhì)相關(guān)過程。賴氨酸的乙?；揎椇驼{(diào)控其發(fā)生的酶與生命的老化過程及一些重大的疾病如癌癥,心血管疾病存在著密切的聯(lián)系,由此蛋白質(zhì)乙?；g后修飾的鑒定具有重要的生物學(xué)意義。傳統(tǒng)乙?；鞍阻b定的方法有放射性檢測和免疫親和檢測,但是這些方法都僅能檢測

2、到乙酰化蛋白的存在,不能得到具體的乙?；揎椢稽c(diǎn)信息。軟電離生物質(zhì)譜技術(shù)ESI-MS和MALDI-MS能很好地應(yīng)用于翻譯后修飾的鑒定研究,不僅能檢測到翻譯后修飾蛋白,且能得到具體的修飾位點(diǎn)信息。
　　 本研究工作旨在考察兩類生物質(zhì)譜技術(shù)ESI-MS和MALDI-MS在乙?；鞍踪|(zhì)翻譯后修飾鑒定中的應(yīng)用及其應(yīng)用于小鼠肝乙?；揎椬V的鑒定研究。本論文的第一章主要對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)中翻譯后修飾的研究發(fā)展,各種翻譯后修飾的鑒定研究策略,乙酰化

3、翻譯后修飾研究進(jìn)展進(jìn)行了概述。本文的研究工作主要分為兩個(gè)部分,分別在第二章和第三章中作了詳細(xì)介紹。第二章的研究中,利用兩類生物質(zhì)譜技術(shù)ESI-MS(LC-IT-TOF質(zhì)譜儀,LTQ-Orbitrap質(zhì)譜儀)和MALDI-MS(4700 Proteomics Analyzer質(zhì)譜儀,QIT質(zhì)譜儀),對(duì)乙?；瘶?biāo)準(zhǔn)蛋白乙酰化BSA進(jìn)行質(zhì)譜鑒定研究,為小鼠肝乙?；鞍踪|(zhì)修飾譜的鑒定研究提供方法學(xué)的參考。實(shí)驗(yàn)表明,LC-ESI-MS(LTQ-Or

4、bitrap)和MALDI-TOF-TOF(4700 proteomic analyzer)兩種方法鑒定乙酰化蛋白較另外兩種質(zhì)譜方法優(yōu)越,且這兩種方法在乙?；笮揎楄b定上具有互補(bǔ)的特性。在第三章的研究中,我們根據(jù)第二章的研究設(shè)計(jì)了兩條小鼠肝乙?；鞍椎蔫b定研究路線,其一為利用成熟的蛋白質(zhì)分離技術(shù)二維凝膠電泳(2DE)分離鼠肝全蛋白,采用生物醫(yī)學(xué)研究院趙世明老師提供的賴氨酸乙?；贵w進(jìn)行2D Western-Blotting驗(yàn)證,將Wes

5、tern-Blotting免疫印跡分析中呈陽性反應(yīng)的點(diǎn)比對(duì)到2DE凝膠,并將篩選到的蛋白點(diǎn)切膠酶解,用4700 Proteomics Analyzer質(zhì)譜儀鑒定分析,鑒定到6個(gè)賴氨酸乙?；鞍?8個(gè)賴氨酸乙酰化修飾位點(diǎn)。其二為利用免疫沉淀技術(shù)富集小鼠肝全蛋白中的乙?；鞍?用LTQ-Orbitrap質(zhì)譜儀分析鑒定,鑒定到91個(gè)賴氨酸乙?；鞍?216個(gè)賴氨酸乙?；揎椢稽c(diǎn)。在鑒定到的97個(gè)乙?；鞍字?大部分未有被文獻(xiàn)報(bào)道過。我們對(duì)鑒定

6、到的蛋白進(jìn)行了生物功能、生理過程、亞細(xì)胞定位的分類。此外,我們用Q-Star飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(ESI源)進(jìn)行了小鼠肝中蘇氨酸和絲氨酸上的乙?；鞍追g后修飾鑒定,鑒定了18個(gè)蘇氨酸乙?；g后修飾蛋白,21個(gè)蘇氨酸乙?；揎椢稽c(diǎn),25個(gè)絲氨酸乙?；揎椀鞍?30個(gè)絲氨酸乙?；揎椢稽c(diǎn),極大地補(bǔ)充了數(shù)據(jù)。本論文的第四章對(duì)乙?；g后修飾的發(fā)展做了總結(jié),對(duì)本研究工作進(jìn)行了展望。本研究為首次結(jié)合兩類生物質(zhì)譜技術(shù)對(duì)小鼠鼠肝樣品進(jìn)行大規(guī)模的乙酰化蛋