組蛋白乙?；瘜?duì)小鼠體外卵母細(xì)胞和胚胎發(fā)育的影響及早期胚胎組蛋白乙?；Ｊ降难芯?pdf

1、組蛋白修飾作為表觀遺傳的一種主要方式，它在細(xì)胞分化、細(xì)胞癌變的發(fā)生、細(xì)胞多能性等諸多方面都有很好的詮釋。組蛋白乙?；欠g后修飾最為重要的方式之一，它有助于基因轉(zhuǎn)錄起始及染色質(zhì)的重塑。組蛋白乙?；揎椩诓溉閯?dòng)物卵母細(xì)胞的成熟及早期胚胎發(fā)育尤為重要。然而，在哺乳動(dòng)物中組蛋白乙?；揎椩诼涯讣?xì)胞減數(shù)分裂和胚胎發(fā)育過(guò)程中的功能相關(guān)性研究卻鮮有報(bào)道。
　　本研究揭示了組蛋白乙?；谛∈舐涯讣?xì)胞減數(shù)分裂和小鼠早期胚胎發(fā)育過(guò)程中組蛋白乙?；瘎?dòng)

2、態(tài)模式。(1)實(shí)驗(yàn)使用不同濃度的組蛋白去乙酰化酶抑制劑丁酸鈉，體外處理GⅤ期卵母細(xì)胞14小時(shí)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低濃度丁酸鈉(0.1，0.5，1.0mM)處理下，卵母細(xì)胞成熟率沒(méi)有顯著差異，然而5.0mM和10.0mM NaBu處理下成熟率分別為為53.3±2.93％、30.2±0.05％ VS78.2±5.72％（對(duì)照組）。這些結(jié)果表明，丁酸鈉具有抑制小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)并以劑量依賴的方式發(fā)生。(2)為了進(jìn)一步研究丁酸鈉在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂

3、GⅤ期至MⅠ期的影響，卵母細(xì)胞在不含丁酸鈉的培養(yǎng)液中培養(yǎng)3h后轉(zhuǎn)入2.0mM丁酸鈉5h，另一實(shí)驗(yàn)組在2.0mM丁酸鈉體外培養(yǎng)8h。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)8h到第一次減數(shù)分裂中期，可檢測(cè)到圓錐狀紡錘體狀牽引著染色體，染色體整齊的排列在赤道板位置。相比于實(shí)驗(yàn)組，染色體則混亂分布并呈凝集的狀態(tài)，且伴隨異常的紡錘體出現(xiàn)。同時(shí)我們利用免疫蛋白印跡方法檢測(cè)MAPK磷酸化狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ERK1/2和P-ERK1/2蛋白水平隨丁酸

4、鈉處理時(shí)間增加而顯著下調(diào)(P＜0.05）。
　　利用免疫熒光技術(shù)分析并進(jìn)一步確定小鼠體內(nèi)胚、體外胚、孤雌胚組蛋白H3K9乙酰化動(dòng)態(tài)模式。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):在胚胎2-細(xì)胞與8-細(xì)胞階段，體內(nèi)胚、體外胚及孤雌胚組蛋白H3K9乙?；?jīng)]有顯著差異。在胚胎4-細(xì)胞階段，體內(nèi)胚組蛋白H3K9乙?；?0.76±0.27)顯著高于孤雌胚(0.29±0.78)(P＜0.05)。桑葚胚和囊胚期，體外胚和孤雌胚組蛋白H3K9乙酰化水平明顯低于體內(nèi)胚

5、(P＜0.05)。在8-細(xì)胞階段，三種胚胎的組蛋白H3K9乙?；_(dá)到最低水平。以上的結(jié)果表明，小鼠的體內(nèi)胚、體外胚及孤雌胚組蛋白H3K9乙酰化呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化的。
　　本研究還評(píng)估了丁酸鈉對(duì)體外受精胚胎發(fā)育率的影響。并且對(duì)組蛋白乙?；{(diào)控基因HDAC1和多能性轉(zhuǎn)錄因子(Pou5f1，Sox2)mRNA表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)。(1)受精卵置于2.0mM NaBu的KSOM+AA培養(yǎng)液處理24h。相比于空白對(duì)照組發(fā)現(xiàn)，在卵裂率和桑葚胚率沒(méi)有明顯