泛素-蛋白酶體系統(tǒng)對(duì)實(shí)驗(yàn)性骨性關(guān)節(jié)炎大鼠軟骨NF-κB信號(hào)通路調(diào)控的研究.pdf

1、目的:鑒于目前NF-κB信號(hào)通路與OA發(fā)病機(jī)制之間的關(guān)系逐漸成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。但UPS作為NF-κB信號(hào)通路激活的始動(dòng)因子之一，其與OA相關(guān)性的研究，在國內(nèi)外尚未見報(bào)道。本課題結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)的理論與方法，運(yùn)用ACL-T+PM同時(shí)結(jié)合FM造模法制作大鼠OA模型，運(yùn)用蛋白酶體抑制劑MG-132進(jìn)行干預(yù)，通過對(duì)軟骨大體觀察，對(duì)軟骨細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、軟骨下骨的光鏡觀察，以及對(duì)軟骨組織20S蛋白酶體活性的測(cè)定，來探究UPS對(duì)OA發(fā)

2、生發(fā)展的影響，研究OA發(fā)生中UPS與NF-κB信號(hào)通路的關(guān)系。為闡明OA的發(fā)病機(jī)理以及泛素-蛋白酶體抑制劑的臨床應(yīng)用提供重要的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.手術(shù)造模：將6只SD大鼠行右后肢ACL-T+PM術(shù)，術(shù)后24h開始在跑步機(jī)上進(jìn)行隔天一次的強(qiáng)迫跑步運(yùn)動(dòng)，30min/次，直到取材。分別于術(shù)后2、4周隨機(jī)處死2只造模大鼠。觀察各取材點(diǎn)關(guān)節(jié)軟骨的大體變化并進(jìn)行OA大體評(píng)分。
　　2.將144只SD大鼠隨機(jī)均分為A、B

3、、C、D組，A、B組建立OA動(dòng)物模型，術(shù)后24h，A組大鼠右膝關(guān)節(jié)腔注射100ul濃度為7ug/ml的MG-132溶液，每周一次，直到取材；B組注射等量0.1％ DMSO；C組為假手術(shù)組，不做任何藥物注射處理；D組為正常大鼠，關(guān)節(jié)腔注射藥物同 A組。四組大鼠均于術(shù)后24h在跑步機(jī)上進(jìn)行隔天一次的強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)，每次30min，直到取材。分別于術(shù)后2、4、12周取材，觀察比較各取材點(diǎn)各組軟骨的大體變化并進(jìn)行OA大體評(píng)分、蘇木精/番紅-O/固綠復(fù)

4、染鏡下觀察并進(jìn)行Mankin炎性評(píng)分及熒光分光光度法測(cè)定20S蛋白酶體活性。
　　結(jié)果:
　　1.手術(shù)造模：發(fā)現(xiàn)2周處死大鼠，右膝關(guān)節(jié)滑膜較對(duì)側(cè)略微增厚，軟骨表面色暗紅，失去正常光澤，關(guān)節(jié)表面欠光滑但尚平整，未見關(guān)節(jié)邊緣骨贅形成，屬于OA病變的早期階段。4周處死大鼠，右膝關(guān)節(jié)滑膜較2周時(shí)明顯增厚，軟骨表面色暗紅，失去正常光澤，關(guān)節(jié)面粗糙，呈磨損性變，軟骨缺損，關(guān)節(jié)邊緣有骨贅形成，屬于OA病變的中期階段。證明大鼠OA模型建立成

5、功。
　　2.肉眼大體觀察及光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，A組軟骨大體評(píng)分及Mankin炎性評(píng)分在各個(gè)取材時(shí)間點(diǎn)均低于B組（P＜0.05）；C、D組大鼠在各個(gè)取材點(diǎn)滑膜增生均不明顯，軟骨表面光滑，呈乳白色或淡藍(lán)色，關(guān)節(jié)邊緣無骨贅形成，軟骨細(xì)胞形態(tài)正常，呈柱狀排列，軟骨基質(zhì)對(duì)番紅-O異染性均勻較深，未見軟骨下骨硬化增厚。
　　3.20S蛋白酶體活性測(cè)定發(fā)現(xiàn)，各組大鼠無論在2、4還是12周，B組大鼠軟骨組織中20S蛋白酶體的活性都最強(qiáng)；其次為

6、C組；A組20S蛋白酶體的活性較B、C組弱，差異具有顯著性（P﹤0.05）；D組20S蛋白酶體的活性最弱。
　　結(jié)論:采用ACL-T+PM聯(lián)合FM的動(dòng)物造模方法建立大鼠膝OA模型是成功的，肉眼大體觀察及光鏡下觀察結(jié)果均與人類OA病理變化相近。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)蛋白酶體抑制劑MG-132通過抑制軟骨組織中20S蛋白酶體的活性，具有延緩OA病變進(jìn)程，減輕OA病變程度，保護(hù)軟骨的作用。同時(shí)證實(shí)UPS在OA發(fā)生發(fā)展中具有非常重要的作用，積極探究