膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路及豹皮樟總黃酮的調(diào)控作用.pdf

1、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以滑膜異常增生，骨和軟骨進(jìn)行性破壞為特征的慢性、系統(tǒng)性和破壞性的自身免疫性疾病，常引起關(guān)節(jié)骨質(zhì)損壞和功能障礙。目前缺乏真正有效而毒副作用小的治療藥物，因此，對(duì)RA的發(fā)病機(jī)理予以系統(tǒng)而合理的解釋，并在中醫(yī)藥領(lǐng)域?qū)ふ腋咝У投究刂芌A病情的新藥是當(dāng)前研究的重要方向。豹皮樟總黃酮(total flavonoids of L itsea coreana Leve.，TFLC)是

2、從我國(guó)藥食同源植物豹皮樟提取的有效部位，具有高效、低毒的作用特征，本課題組前期已經(jīng)證實(shí)了TFLC對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠有明顯的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，但其作用機(jī)制仍尚不明確，值得進(jìn)一步深入研究。
　　 盡管RA的發(fā)病機(jī)制目前仍不完全清楚，但已有研究顯示其中自身抗體，抗原抗體復(fù)合物，炎癥介質(zhì)，炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生起到了重要的作用。有研究報(bào)道許多炎性細(xì)胞因子（TNF-α，IL-1，iNOS，COX-2等）的表達(dá)受到核因子κB（NF-κB）的調(diào)

3、節(jié)，據(jù)此我們推測(cè)TFLC也是通過調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路而產(chǎn)生抗炎作用。因此，本課題在成功提取純化CII、建立大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎（collagen-induced arthritis，CIA）模型的基礎(chǔ)上，以CIA大鼠腹腔巨噬細(xì)胞（PMΦ）為靶細(xì)胞，研究體外TFLC對(duì)PMΦ炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響作用，并重點(diǎn)觀察TFLC對(duì)LPS刺激的CIA大鼠PMΦ上NF-κB活化的影響作用，從而進(jìn)一步闡明TFLC對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎防治作用的分子機(jī)制，為將其

4、開發(fā)為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。主要研究包括以下三個(gè)方面：
　　 1.建立大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎模型采用自提CII建立大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎（Collagen-induced arthritis，CIA）模型，從體重、足爪腫脹度、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎評(píng)分、病理等幾個(gè)方面評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)TFLC對(duì)CIA大鼠的治療作用。結(jié)果顯示：TFLC（50、100、200 mg·kg-1）能抑制關(guān)節(jié)腫脹，增加CIA大鼠體重，改善膝關(guān)節(jié)病理?yè)p傷。
　　 2.體

5、外TFLC對(duì)CIA大鼠PMΦ免疫功能及產(chǎn)生炎性介質(zhì)和炎性細(xì)胞因子的影響無(wú)菌取PMΦ，采用TFLC與CIA大鼠PMΦ體外共培養(yǎng)，研究TFLC對(duì)CIA大鼠PMΦ免疫功能及產(chǎn)生炎性介質(zhì)和炎性細(xì)胞因子的影響。結(jié)果表明：TFLC（0.05、0.5、5μg·ml-1）可降低CIA大鼠PMΦ過強(qiáng)的吞噬功能，下調(diào)脾細(xì)胞IL-2的分泌水平和腹腔巨噬細(xì)胞IL-1的分泌水平，同時(shí)抑制PMΦ TNF-α，NO的分泌水平。且反轉(zhuǎn)錄RT-PCR結(jié)果表明，TFLC可

6、抑制LPS刺激的CIA大鼠PMΦ炎性細(xì)胞因子TNF-α，IL-1，iNOS和COX-2 mRNA的表達(dá)，并促進(jìn)抑炎性細(xì)胞因子IL-10 mRNA的表達(dá)。提示其降低CIA大鼠PMΦ過強(qiáng)的吞噬功能，抑制炎性細(xì)胞因子的分泌和表達(dá)可能是其對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療和防治作用機(jī)制之一。
　　 3.TFLC對(duì)LPS刺激的CIA大鼠PMΦ中NF-κB的活化以及對(duì)胞質(zhì)核因子抑制蛋白α（IκBα）表達(dá)的影響蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)NF-κB/p65蛋白

7、及胞質(zhì)中核因子抑制蛋白IκBα的表達(dá)量。結(jié)果表明：LPS組中胞核NF-κB/p65蛋白表達(dá)水平明顯高于其余四組，胞質(zhì)IκBα蛋白表達(dá)水平明顯低于其余組。TFLC（0.05、0.5、5μg·ml-1）可以抑制NF-κB的活性和IκBα的降解。推出TFLC通過抑制NF-κB的轉(zhuǎn)錄水平來(lái)抑制LPS誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子表達(dá)，表明TFLC可通過NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控炎癥的發(fā)生發(fā)展，進(jìn)一步明確了TFLC對(duì)關(guān)節(jié)炎的防治作用的分子機(jī)制，為RA的免疫治