葛根素對兔膝關節(jié)骨性關節(jié)炎關節(jié)軟骨基質金屬蛋白酶及其抑制劑的影響.pdf

1、目的:膝關節(jié)骨性關節(jié)炎是臨床常見病、多發(fā)病，隨著社會人口的老齡化，該病越來越成為社會和家庭沉重的負擔。該病以關節(jié)軟骨變性、破壞、軟骨下骨硬化為主要病理特點，其中關節(jié)軟骨的退行性改變是骨性關節(jié)炎發(fā)病的病理基礎和核心。本研究從對關節(jié)軟骨中基質金屬蛋白酶及其抑制劑著手，探討葛根素對骨性關節(jié)炎關節(jié)軟骨的影響，以及其治療膝關節(jié)骨性關節(jié)炎的作用機制，初步闡明葛根素治療骨性關節(jié)炎的作用機理。 方法:本實驗設5組，將50只體重2kg(±200g

2、)健康成年大白兔(雌雄各半)將動物隨機分為正常組、模型組、生理鹽水組、透明質酸組、葛根素組。隨機抽出的10只作為正常組，其余40只采用Hulth方法進行造模，即通過切斷內側副韌帶、內側半月板前角、前交叉韌帶的方法造模，造模手術1周后行驅趕4周，即得明顯的KOA模型。待骨性關節(jié)炎模型建立后，正常組不做任何處理；模型組僅按Hulth法造模，不給藥治療；生理鹽水組、透明質酸組、葛根素組分別于動物模型制備后的第1周開始在嚴格無菌操作下，膝關節(jié)內

3、注射0.9％生理鹽水、透明質酸、葛根素各0.3ml，其后每周注射2次，共10次，即用藥5周。治療結束1周后，分別空氣栓塞處死，顯露膝關節(jié)腔。①肉眼觀察關節(jié)軟骨、照相，觀察形態(tài)學改變；并切取制備關節(jié)軟骨標本，在光鏡下觀察組織學變化。②取股骨內髁退變軟骨制成軟骨組織切片，用免疫組化的方法檢測各組軟骨中基質金屬蛋白酶-1(MMP-1)及及其抑制劑(TIMP-1)的表達。③用反轉錄—多聚酶鏈反應(RT—PCR)的方法檢測各組軟骨中MMP-1及T

4、IMP-1 mRNA表達。 結果:①肉眼見正常組關節(jié)面光滑有光澤，軟骨透明無明顯缺損和新生物物，滑膜無充血。造模組關節(jié)面不光滑，無光澤，軟骨不透明，有明顯缺損和新生物，滑膜色暗充血腫脹。葛根素組關節(jié)腔未見明顯新生物，色澤較暗，軟骨較光滑但透明差。生理鹽水組表現(xiàn)同模型組；透明質酸組與葛根素組類似。光鏡觀察見葛根素組軟骨細胞較平整，表層軟骨細胞壞死變性較模型組和生理鹽水組輕，炎性細胞滲出物少見，可見新生血管和成纖維細胞增生。②正常組

5、有少許MMP-1及TIMP-1的陽性表達，模型組MMP-1的陽性細胞計數(shù)較正常組明顯增多，表達量增加，而TIMP-1表達呈陰性，生理鹽水組與模型組相似；葛根素組和透明質酸組MMP-1的陽性細胞數(shù)較模型組減少，表達量較模型組降低，葛根素組與模型組和生理鹽水組比較減少明顯有差異(P＜0.05)。TIMP-1在葛根素組和透明質酸組中的表達均較低，且無顯著的差異。③MMP-1和TIMP-1的mRNA陽性表達率：正常組MMP-1及TIMP-1在軟

6、骨組織mRNA表達較低，模型組MMP-1軟骨組織mRNA表達與正常組比較顯著增高(P＜0.05)，生理鹽水組與模型組類似。透明質酸組和葛根素組MMP-1 mRNA表達高于正常組，較模型組低。TIMP-1在模型組呈陰性表達，生理鹽水組與模型組類似；透明質酸組和葛根素組關節(jié)軟骨中TIMP-1 mRNA表達均較低，與模型組和生理鹽水組比較有顯著差異(P＜0.05)。 結論:基質金屬蛋白酶較能反映骨關節(jié)軟骨代謝變化，它對關節(jié)軟骨細胞外基

7、質具有降解作用，對加重軟骨退變破壞有著十分重要的關系。通過實驗研究發(fā)現(xiàn)兔膝關節(jié)軟骨組織的MMP-1表達明顯升高，而TIMP-1表達極少，且軟骨組織細胞外基質Ⅱ型膠原含量明顯下降；而經(jīng)過葛根素治療的動物軟骨中MMP-1的表達下降，TIMP-1的表達升高，說明葛根素能使關節(jié)軟骨中MMP-1的含量降低，使得細胞外基質的膠原含量升高，說明葛根素具有一定的抑制細胞外基質中膠原的降解作用，從而有可能減緩骨性關節(jié)炎的病程進展，為葛根素治療膝關節(jié)骨性關