IL-27在艱難梭菌腸道感染中的免疫作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　IL-27是調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答的重要細(xì)胞因子，但在艱難梭菌感染中的免疫學(xué)作用尚不明確，因此本研究探討了IL-27在艱難梭菌感染過程中的表達(dá)和發(fā)揮的作用及其作用機(jī)制。
　　方法：
　　采用ELISA檢測艱難梭菌感染病人樣本中IL-27的表達(dá)并分析IL-27與實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)的相關(guān)性；q-PCR和ELISA檢測艱難梭菌刺激的DCs胞內(nèi)IL-27mRNA和上清中蛋白水平的表達(dá)；采用信號抑制劑處理DCs24h，用ELI

2、SA檢測上清中IL-27的表達(dá)變化，Western blot檢測DCs胞內(nèi)信號蛋白的磷酸化情況。用C57BL/6背景的IL-27R-/-鼠（KO）和野生鼠（WT）構(gòu)建艱難梭菌感染模型，多方面檢測感染效果后，檢測CDI小鼠體內(nèi)細(xì)胞因子的表達(dá)情況，并用重組IL-27治療小鼠觀察效應(yīng)，通過檢測細(xì)胞因子的表達(dá)、細(xì)胞吞噬功能的相關(guān)試驗(yàn)，對IL-27作用機(jī)制進(jìn)行初步探究。此外，我們還檢測了CDI患者和小鼠血清及腸組織中CXCL13的表達(dá)情況，并根據(jù)

3、患者臨床實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)進(jìn)行回顧性分析，探討CXCL13在CDI中的表達(dá)及臨床意義。
　　結(jié)果：
　　CDI病人的血清和糞便中IL-27表達(dá)水平均升高，血清中IL-27水平與WBC呈正相關(guān)；艱難梭菌可激活DCs產(chǎn)生IL-27，在該菌刺激DCs后5min、30min時，P38MAPK、ERK、JNK、AKT、JAK、NF-κB的磷酸化顯著增高。IL-27在艱難梭菌感染小鼠中表達(dá)水平顯著升高；CDI后，與WT鼠相比，KO小鼠生存率

4、低，體重下降早、幅度大，腸內(nèi)容物艱難梭菌菌載量高，腸組織損傷嚴(yán)重，提示IL-27在CDI是可能起保護(hù)作用；直接用recombinant IL-27治療CDI小鼠后發(fā)現(xiàn)，小鼠生存率提高，艱難梭菌感染癥狀得到了改善，這可能與治療后IFN-γ升高有關(guān)，提示IFN-γ在CDI過程中有著至關(guān)重要的作用；IL-27預(yù)處理細(xì)胞24h后，檢測細(xì)胞對艱難梭菌的吞噬作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-27可增強(qiáng)PMs的吞噬活性，對中性粒細(xì)胞的吞噬活性無影響。此外，在CDI