昆明白小鼠胚胎干細(xì)胞建系方法及相關(guān)特性研究.pdf

1、胚胎干細(xì)胞(ES cell)是具有多向分化能力的全能性細(xì)胞。研究和利用ES細(xì)胞是當(dāng)前生物工程領(lǐng)域的核心問題之一。至今建立的小鼠ES細(xì)胞系大多來源于129，C57BL/6J，BALA/C等品系，有關(guān)昆明白小鼠ES細(xì)胞建系研究較少。作為國內(nèi)普遍使用的一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，探討昆明白小鼠胚胎干細(xì)胞建系方法更具應(yīng)用廣泛性。 本實(shí)驗(yàn)研究了內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ICM)獲取方法，培養(yǎng)系統(tǒng)，傳代方法等胚胎干細(xì)胞建系過程中必不可少的技術(shù)環(huán)節(jié)，探索了大鼠心肌細(xì)胞條

2、件培養(yǎng)基培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞效果；對(duì)比了不同飼養(yǎng)層對(duì)胚胎干細(xì)胞集落形成的影響及維持能力，結(jié)果表明：自制的兔抗小鼠多克隆抗體能有效去除小鼠囊胚的滋養(yǎng)層；將獲得的ICM在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(PMEF)飼養(yǎng)層且添加白血病抑制因子(LIF)條件下培養(yǎng)，胚胎干細(xì)胞傳代效果最佳，體外培養(yǎng)已傳至第8代；所培養(yǎng)的ES細(xì)胞具有巢狀集落形態(tài)，和周圍飼養(yǎng)層細(xì)胞存在明顯界線，集落內(nèi)部細(xì)胞間連接緊密；ES集落經(jīng)堿性磷酸酶染色呈強(qiáng)陽性；體外分化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞仍