人胚胎早期發(fā)育及人胚胎干細胞建系的初步研究.pdf

1、該實驗從未經(jīng)促性腺激素刺激的多囊卵巢綜合征(PCOS)患者的卵巢皮質(zhì)層小卵泡穿刺獲得未成熟卵,并對其體外成熟、受精和早期胚胎發(fā)育進行了初步研究.未經(jīng)刺激的未成熟卵受精后胚胎發(fā)育分別停滯于早期胚胎發(fā)育的各個時期,特別是2~8細胞期,最終只有極少部分能發(fā)育至桑葚胚和囊胚(分別為10.87％和6.52%).結(jié)果提示,取卵前是否經(jīng)過促性腺激素刺激對人未成熟卵的核成熟無顯著影響,未經(jīng)刺激的未成熟卵經(jīng)過體外成熟培養(yǎng),可以重新啟動第一次減數(shù)分裂,完成

2、核成熟,并休止于M-Ⅱ期.但是,未經(jīng)刺激的未成熟卵成熟后的受精率和胚胎發(fā)育能力低,細胞質(zhì)的成熟問題可能是造成這一現(xiàn)象的主要原因.另外,該研究的IVMM做為一種單一的培養(yǎng)液,不能完全模擬生理條件下卵母細胞發(fā)育的各個階段所處的環(huán)境.應該根椐培養(yǎng)前卵母細胞的成熟度和其卵泡的發(fā)育狀態(tài)選用不同成分的培養(yǎng)液分階段成熟培養(yǎng),以利于卵母細胞的充分成熟.為了尋找能預示卵母細胞受精和胚胎發(fā)育能力的形態(tài)標記,ICSI前依據(jù)第一極體和卵周隙的形態(tài)以及細胞質(zhì)有無

3、內(nèi)容物,對卵母細胞進行分組,比較各組間的受精率和卵裂率以及移植當天的優(yōu)質(zhì)胚胎率.研究發(fā)現(xiàn),不同極體和卵周隙形態(tài)的卵母細胞ICSI后受精率有顯著差異(P=0.044);無細胞質(zhì)內(nèi)容物的卵母細胞其受精后的優(yōu)質(zhì)胚胎率顯著高于有內(nèi)容物的卵母細胞(P=0.011).因此推測,卵母細胞的第一極體形態(tài)和卵周隙大小反映了卵母細胞的成熟度,受精前觀察卵母細胞第一極體和卵周隙的形態(tài)可以預測ICSI后的受精能力.卵周隙正常,第一極體完整、形態(tài)不規(guī)則的卵母細胞

4、成熟度最理想,ICSI后受精率最高.而卵母細胞中有無細胞質(zhì)內(nèi)容物與其細胞質(zhì)成熟度相關,細胞質(zhì)內(nèi)容物可能提示卵母細胞細胞質(zhì)不熟或過熟,對預測受精后早期胚胎發(fā)育的能力具有重要價值.我們對人囊胚內(nèi)細胞團的分離、胚胎干細胞的培養(yǎng)條件和傳代方法進行了初步探討.該研究用于人ES細胞系建系的胚胎主要來源于臨床IVF或ICSI周期中的廢棄胚胎,其發(fā)育能力較差.實驗發(fā)現(xiàn),胚胎質(zhì)量與原代集落的形成密切相關,囊胚形成率低、質(zhì)量差,是限制建系成功的主要因素之一