提高牛體細(xì)胞核移植效率的研究.pdf

1、體細(xì)胞核移植技術(shù)(SCNT)具有巨大的潛力和廣闊的應(yīng)用前景,如:培育優(yōu)良畜種和生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、保護(hù)瀕危動(dòng)物、進(jìn)行治療性克隆和生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等,但核移植效率的低下制約了其產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展,在克隆機(jī)理尚未闡明的情況下,通過技術(shù)方法上的提高無疑為核移植本身的發(fā)展提供了契機(jī)。本課題以活體取卵(OPU)牛的卵母細(xì)胞為核受體,依次針對(duì)核移植操作過程中的去核技術(shù)、供核細(xì)胞處理技術(shù)、重構(gòu)胚的活化技術(shù)及胚胎的培養(yǎng)技術(shù)五個(gè)關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)設(shè)計(jì)了相應(yīng)實(shí)驗(yàn),以提高牛核移

2、植的效率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Hoechst33342染色去核法相對(duì)盲吸去核法明顯提高了去核率(100％:60%);采用pronase酶處理供核細(xì)胞后其融合率明顯高于不經(jīng)pronase酶處理組的融合率(78.69%:54.88%);離子霉素活化方法與電活化方法對(duì)重構(gòu)胚卵裂率無明顯影響(59.35%:58.84%),但活化后的死亡率顯著的降低(5.10%:23.26%);使用ACM與胎鼠皮膚成纖維細(xì)胞(MEF)共培養(yǎng)體系時(shí)的囊胚率明顯高于B2與