中國人非小細胞肺癌PIK3CA基因突變及FGFR融合基因研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 中國人非小細胞肺癌PIK3CA基因突變研究
　　肺癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，在腫瘤相關死亡率中居首位。其中，約85％是非小細胞肺癌，主要包括鱗狀細胞癌、腺癌和大細胞癌等。近來年，盡管外科手術治療、腫瘤含鉑化療和以吉非替尼、厄羅替尼為代表的靶向治療等取得了長足的發(fā)展，但全球范圍內非小細胞肺癌的5年生存率仍只有10％-15％。研究表明，磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路與腫瘤生

2、成密切相關。靶向于PI3K通路成員的抑制劑被證明有明顯抗腫瘤作用并已進入臨床試驗。然而，對PIK3CA基因突變、擴增以及PI3K P110α，p-Akt，mTOR，PTEN表達的綜合分析罕有報道。中國人非小細胞肺癌PIK3CA基因突變及與其他驅動癌基因突變關系仍不很清楚。弄清以上問題，將有利于了解中國人群PIK3CA基因突變現狀并有助PI3K靶向藥物患者選擇。
　　基于以上情況，我們開展本部分研究，回顧分析復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院11

3、17例臨床肺癌手術切除新鮮冰凍標本，提取RNA，逆轉錄為cDNA后進行逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)。對PCR產物進行基因測序檢測PIK3CA（9號外顯子和20號外顯子），EGFR(18-21號外顯子)，KRAS（2號和3號外顯子），HER2(18-21號外顯子)，BRAF(11-15號外顯子)，AKT1(2-3號外顯子)的基因突變以及ALK(EML4-ALK, KIF5B-ALK和TFG-ALK)基因融合情況。對研究中發(fā)現的PIK

4、3CA突變標本及野生PIK3CA對照標本（連續(xù)收集自2008年7月至2009年6月肺鱗癌、腺癌野生PIK3CA樣本），以熒光原位雜交(fluorescent in situhybridization，FISH)法檢測PIK3CA基因拷貝數，以免疫組織化學法（immunohistochemical，IHC）檢測PI3K P110α，p-Akt，mTOR和PTEN的表達。研究發(fā)現，1117例非小細胞肺癌中共有34例PIK3CA基因突變，80

5、7例腺癌和310例鱗癌中PIK3CA的突變頻率分別為2.7％和3.9％。在34例PIK3CA突變中，17例伴EGFR突變，4例伴KRAS突變。PIK3CA基因突變與PI3K P110α(p=0.0001)，p-Akt(p=0.024)以及mTOR(p=0.001)表達呈正相關，但與PIK3CA基因拷貝數無明顯相關性(p=0.463)。僅存在PIK3CA突變患者的總生存時間較PIK3CA-EGFR/ KRAS共突變者明顯縮短(p=0.00

6、4）。在無GFR/ KRAS突變的亞組，PIK3CA突變提示預后不良。
　　本部分研究成果表明，中國人非小細胞肺癌患者PIK3CA基因突變多合并有EGFR或KRAS突變;單一PIK3CA突變提示預后不良;無EGFR/KRAS突變亞組PIK3CA突變提示預后不良。本課題的研究結果可以對臨床肺癌癌基因驅動突變篩選提供參考，有利于PIK3CA靶向藥患者選擇及判斷預后，具有臨床實用性。
　　第二部分 中國人非小細胞肺癌FGFR融合基

7、因研究
　　肺癌是世界范圍內最常見的癌癥致死原因，占所有腫瘤死亡病例的約18％。其中，非小細胞肺癌占所有肺癌的85％左右，大部分非小細胞肺癌患者在被發(fā)現時已為晚期從而失去手術根治的機會。隨著對非小細胞肺癌遺傳學研究的深入，針對特定驅動突變的靶向藥物已被證明可以使腫瘤產生明顯的消退，并顯著延長患者無疾病生存期。近來，致癌融合基因如RET融合基因抑制劑凡德他尼(Vandetanib)和卡博替尼(Cabozantinib)，ALK與RO

8、S1融合基因抑制劑克唑替尼(Crizotinib)已被證明可有效治療特定亞型的肺癌。但是，東亞人群中，仍然有30％的吸煙肺腺癌和88％的肺鱗癌尚沒有明確驅動基因突變/融合。新近研究表明，成纖維細胞生長因子受體(FGFR)融合基因與腫瘤生成密切相關，靶向于FGFR的抑制劑有明顯抗腫瘤作用并已進入前期臨床試驗。然而對非小細胞肺癌FGFR融合基因及與其他驅動基因關系的研究罕有報道，中國人非小細胞肺癌FGFR基因融合情況仍不十分清楚。弄清以上問

9、題，將有利于了解中國人群FGFR融合基因現狀并有助于FGFR靶向藥物患者選擇。
　　本項研究第二部分回顧分析復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院1328例臨床非小細胞肺癌手術切除新鮮冰凍標本，提取RNA，逆轉錄為cDNA后進行RT-PCR。直接測序檢測FGFR1，FGFR2, FGFR3基因融合情況，并分析患者EGFR,KRAS,HER2和BRAF突變、ALK、 RET、 ROS1融合基因情況以及患者臨床病理特征。對研究中發(fā)現的FGFR融合基因突

10、變標本與野生FGFR對照標本（連續(xù)收集自2011年7月至2012年12月的肺鱗癌樣本），以免疫組織化學法（immunohistochemical，IHC）檢測FGFR1，FGFR2, FGFR3表達。研究發(fā)現，1328例非小細胞肺癌中有17例FGFR融合基因，其中15例為FGFR3-TACC3，2例為BAG4-FGFR1，并且與其他基因突變/融合不共存。有吸煙史(p＜0.001)，腫瘤直徑＞3cm(p＜0.001)的男性(p=0.002

11、)鱗癌(p＜0.001)患者更易出現FGFR基因融合，腺癌FGFR融合基因樣本中多含實體亞型。FGFR融合基因狀態(tài)與免疫組織化學表達呈正相關，FGFR基因融合與患者的總生存時間以及無復發(fā)生存時間無明顯相關性。
　　本課題的研究成果表明，中國人群中1.3％的非小細胞肺癌、3.5％的肺鱗癌中存在FGFR基因融合。腫瘤最大徑大于3厘米的吸煙鱗癌患者更易出現FGFR融合基因。本課題的研究結果可以對臨床肺癌癌基因驅動基因突變/融合篩選提供參