蜱組胺結(jié)合蛋白的重組表達及其生物學(xué)功能分析.pdf

1、蜱是一種常見的吸血體外寄生蟲，給畜牧業(yè)和人類的健康帶來了嚴重的影響。蜱的寄生會引起宿主失血、不安和皮膚損傷，同時在叮咬過程中蜱可以傳播多種疾病。蜱叮咬可以誘發(fā)宿主產(chǎn)生炎癥反應(yīng)、凝血反應(yīng)和免疫反應(yīng)等，為了克服宿主的這些反應(yīng)，蜱的唾液腺通過分泌一些生物大分子干擾宿主的反應(yīng)，如抗凝血分子、免疫抑制分子和抗炎癥分子等，這些分子有成為治療血凝相關(guān)疾病，腫瘤，以及自身免疫性疾病的藥物的潛力，其中蜱組胺結(jié)合蛋白（Histamine binding p

2、rotein）就是這些分子中的一種。蜱組胺結(jié)合蛋白是由蜱的唾液腺分泌的具有特異性結(jié)合組胺的一類功能性蛋白的總稱，是蜱的重要抗炎癥分子之一。
　　亞洲璃眼蜱隸屬于硬蜱科璃眼屬，為三宿主蜱，廣泛分布于我國的西北部地區(qū)（新疆、內(nèi)蒙、寧夏）以及中亞地區(qū)。本實驗室成功從亞洲璃眼蜱唾液腺中克隆表達出組胺結(jié)合蛋白(Histamine binding protein of Hyalomma asiaticum,HaHBP)。為了進一步深入研究Ha

3、HBP的功能特點，在已有的實驗數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上對亞洲璃眼蜱唾液腺中的HaHBP進行了重組表達及生物學(xué)功能分析。首先，對實驗室保存的pGEX-4T-1-HaHBP/BL21重組質(zhì)粒的菌種進行活化，經(jīng)擴大培養(yǎng)，16℃低溫，1M IPTG誘導(dǎo)，GST樹脂親和層析純化，獲得了純度較高的HaHBP-GST重組蛋白。其次，將編碼HaHBP的基因片段克隆至真核表達載體pFastBacHTa，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至 DH10Bac感受態(tài)細胞中，構(gòu)建重組桿粒rBa

4、c-HaHBP，轉(zhuǎn)染至sf9昆蟲細胞，進行重組蛋白的表達純化。經(jīng)SDS-PAGE、Western blot和IFA檢測結(jié)果表明，HaHBP在Bac-to-Bac桿狀病毒系統(tǒng)中穩(wěn)定表達，重組蛋白大小與預(yù)期一致。將原核表達和真核表達的HaHBP重組蛋白在不同濃度梯度的條件下與HRP-histamine共同孵育，進行組胺結(jié)合實驗，結(jié)果表明，兩種表達系統(tǒng)所表達的重組蛋白都具有組胺結(jié)合的能力。最后，分別通過涂抹和滴鼻給藥的方法探究HaHBP對二甲