丙戊酸聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠脊髓損傷的影響.pdf

1、為了探討腹腔注射丙戊酸(VPA)輔佐骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)對大鼠脊髓損傷(SCI)后神經(jīng)功能恢復(fù)的作用。
　　本實驗選用3-4周齡健康雄性SD幼鼠，體外分離培養(yǎng)BMSCs，對第3代BMSCs進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測，收集備用。把60只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組:假手術(shù)組（A組）、模型組（B組）、丙戊酸組（C組）、移植組（D組）和聯(lián)合組（E組）。動物脊髓損傷模型選用改良的Allen's法制作。丙戊酸組傷后給予腹腔注射VPA(30

2、0mg.kg-1)，每12h給一次藥直至取材;移植組在損傷段脊髓注入BMSCs1mL濃度為1×106mL-1;聯(lián)合組同時注入VPA和BMSCs，假手術(shù)組和模型組注射等體積的0.9％氯化鈉。大鼠在傷后7d、14d先行后肢(BBB)運動功能評分，隨后處死取材。用蘇木精-伊紅染色法(HE)染色觀察脊髓空洞面積，用免疫組化法檢定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表達(dá)情況，通過脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNE

3、L)染色觀察脊髓組織切片神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況。
　　實驗結(jié)果顯示，BBB評分:假手術(shù)組、模型組、丙戊酸組、移植組和聯(lián)合組在SCI后7d分別為(21)，(2.22±0.33)，(3.80±0.53)，(3.81±0.83)，(4.02±0.83);在SCI后14d分別為(21)，(4.51±0.41)，(7.25±0.95)，(7.32±0.55)，(9.76±0.95)。假手術(shù)組運動功能正常，3個治療組的BBB評分明顯比模型組高(P＜

4、0.05)。在SCI后第14d聯(lián)合組的評分明顯高于丙戊酸組和移植組(P＜0.05)。HE染色結(jié)果:模型組、丙戊酸組、移植組和聯(lián)合組損傷區(qū)域的面積分別是(4.57±0.26)mm2,(3.34±0.21)mm2,(3.51±0.18)mm2,(2.43±0.35)mm2。聯(lián)合組損傷空洞及瘢痕組織面積明顯比其余的3個組低(P＜0.05)。免疫組化染色:假手術(shù)組、模型組、丙戊酸組、移植組和聯(lián)合組在SCI后7d的Caspase-3免疫組化陽性目

5、標(biāo)面密度分別為(1.51±0.23)％,(28.51±5.23)％,(24.39±4.65)％,(24.51±3.81)％，(20.73±3.43)％。在SCI后14d的Caspase-3免疫組化陽性目標(biāo)面密度分別為(1.64±0.41)％，(26.22±4.81)％，(21.21±4..04)％，(21.47±3.32)％，(16.15±3.09)％。假手術(shù)組少量caspase-3陽性表達(dá)，3個治療組的caspase-3表達(dá)明顯低于模

6、型組(P＜0.05)。而聯(lián)合組的caspase-3陽性表達(dá)明顯低于丙戊酸組和移植組(P＜0.05)。細(xì)胞凋亡結(jié)果:假手術(shù)組、模型組、丙戊酸組、移植組和聯(lián)合組在SCI后14d的凋亡指數(shù)分別為(4.18±0.39)％，(40.51±3.81)％,(19.95±2.04)％,(20.87±2.32)％,(12.83±1.09)％。傷后14d假手術(shù)組存在少量凋亡陽性細(xì)胞。與模型組相比，3個治療組的凋亡指數(shù)較低(P＜0.05)，而3個治療組之間，