轉(zhuǎn)基因骨髓間充質(zhì)干細胞移植修復成年大鼠脊髓損傷.pdf

1、本課題自大鼠骨髓分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)，構(gòu)建了分別攜帶腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain derived neurotrophicfactor，BDNF)及神經(jīng)營養(yǎng)素-3(neurotrophin-3，NT-3)基因的真核表達質(zhì)粒，經(jīng)陽離子脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染MSCs，G418篩選獲穩(wěn)定表達目的基因的細胞株，之后移植修復成年大鼠脊髓完全橫斷傷。 主要研究結(jié)果有： 1．自成年大

2、鼠骨髓分離單個核細胞，經(jīng)連續(xù)傳代培養(yǎng)后，行克隆培養(yǎng)及成骨和成脂肪誘導分化，發(fā)現(xiàn)克隆培養(yǎng)的上述細胞大多數(shù)可以形成典型的細胞克隆，經(jīng)成骨誘導后有鈣結(jié)節(jié)沉積，經(jīng)成脂肪誘導后細胞內(nèi)出現(xiàn)脂肪滴，證實獲得骨髓來源的間充質(zhì)干細胞； 2．利用優(yōu)化的成神經(jīng)元誘導體系，誘導細胞獲得典型的神經(jīng)元樣外觀，維持培養(yǎng)1周后，70％以上的細胞呈現(xiàn)MAP-2(microtubuleassociated protein-2，微管相關蛋白-2)免疫反應陽性；

3、 3．脊髓半橫斷后局部移植Hoechst標記MSCs，2月后切片觀察，可見注射點周圍密集的Hoechst標記細胞存活，細胞遷移主要沿脊髓縱軸方向、并跨過損傷區(qū)，遷移距離超過0.5cm，同時可見少量細胞沿水平方向遷移到注射點周圍遠隔部位，免疫組化染色顯示少量(少于10％)存活細胞表達神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細胞標記物； 4．脊髓半橫斷后不同時間點，經(jīng)尾靜脈注射移植MSCs，發(fā)現(xiàn)在脊髓損傷后1月內(nèi)移植者移植細胞可在脊髓損傷部位明顯聚集并良

4、好存活，損傷5周時移植則局部細胞明顯減少，而6周時移植則基本觀察不到移植細胞的聚集現(xiàn)象，提示脊髓損傷后在一定時間窗內(nèi)經(jīng)血移植MSCs治療在理論上是成立的； 5．大鼠脊髓完全橫斷傷后局部微注射移植MSCs、BDINF轉(zhuǎn)染MSCs、NT-3轉(zhuǎn)染MSCs以及BDNF轉(zhuǎn)染MSCs+NT-3轉(zhuǎn)染MSCs，結(jié)果顯示單純MSCs移植可在一定程度上促進神經(jīng)再生及運動功能恢復，經(jīng)BDNF或NT-3基因修飾后可改善上述治療作用，而同時進行BDNF、