骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合超短波對大鼠脊髓損傷后軸突再生和再髓鞘化的影響.pdf

1、目的：
　　觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)移植聯(lián)合小劑量超短波(ultrashortwave，USW)治療對大鼠脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)后功能恢復(fù)、軸突再生及再髓鞘化的影響，研究并探討其作用機(jī)制。
　　方法：
　　雌性SD大鼠92只，隨機(jī)分為5組:假手術(shù)組（sham組）、對照組（control組）、USW治療組（USW組）、BMSC

2、s移植組（BMSCs組）、聯(lián)合治療組(USW+BMSCs組)。其中sham組8只，于術(shù)后1w、2w、3w、4w各取材2只;control組及USW組根據(jù)術(shù)后觀察時(shí)間分為1w、2w、3w、4w組，每組6只，共48只;BMSCs組及USW+BMSCs組根據(jù)術(shù)后觀察時(shí)間分為2w、3w、4w組，每組6只，共36只。①control組，手術(shù)后1w損傷區(qū)域注入DMEM/F12培養(yǎng)基5μl。②BMSCs組，手術(shù)后1w損傷區(qū)域注入密度為1×106/μ1

3、 BMSCs懸液5μl。③USW組，SCI術(shù)后24h后給予小劑量USW治療（最大功率為40W，實(shí)際輸出功率約11.58W），每日1次，每次7min，直至取材前。④USW+BMSCs組，SCI術(shù)后24h后給予小劑量USW治療，每天1次，每次7min，術(shù)后1w損傷區(qū)域注入密度為1×106/μl的BMSCs懸液5μl，移植術(shù)后24h后繼續(xù)行USW治療，直至取材前。大鼠的運(yùn)動功能用BBB評分進(jìn)行評定，取材后行HE染色觀察脊髓損傷處損傷面積，免疫

4、組化檢測Nogo-A、GAP-43、MBP、BDNF的蛋白表達(dá)量，從而觀察BMSCs移植聯(lián)合USW治療對SCI后的大鼠在功能恢復(fù)方面的影響、再髓鞘化以及軸突再生的影響，并初步探討其作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，①BBB評分，SCI術(shù)后2-4w，USW組及USW+BMSCs組BBB評分恢復(fù)明顯，與control組比較均有顯著差異（P＜0.001），BMSCs組與control組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);②S

5、CI術(shù)后4w，USW組、BMSCs組、BMSCs+USW組損傷面積均較control組小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001，P＜0.001，P＜0.001);USW+BMSCs組分別與USW組、BMSCs組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001，P＜0.001);③Nogo-A陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)在術(shù)后1w表達(dá)至高峰，后逐漸下降，術(shù)后2-4wUSW+BMSCs組的表達(dá)明顯少于control組(P＜0.001，P＜0.001，P＜0.001)，U

6、SW組、BMSCs組與control組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;USW+BMSCs組在術(shù)后4w時(shí)較USW組Nogo-A下降明顯(P＜0.001)，但與BMSCs組比較各時(shí)間點(diǎn)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)方面的意義;④GAP-43陽性細(xì)胞計(jì)數(shù):USW組GAP-43陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)較control組雖有增加趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），BMSCs組、USW+BMSCs組在術(shù)后2-4w較control組均明顯增加(P＜0.01); USW+BM

7、SCs組在術(shù)后2-4w與USW組比較，GAP-43的表達(dá)也明顯增加(P＜0.05，P＜0.001，P＜0.001)，但與BMSCs組比較無明顯差異;BMSCs組在術(shù)后4w時(shí)GAP-43的表達(dá)明顯高于USW組(P＜0.05)。⑤MBP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù):在術(shù)后1-4w，USW組MBP的陽性細(xì)胞數(shù)明顯高于control組(P＜0.001，P＜0.01，P＜0.001，P＜0.001)，且下降趨勢變緩;BMSCs組的MBP表達(dá)在術(shù)后3w、4w較co

8、ntrol組明顯增多（P＜0.001，P＜0.001）;USW+BMSCs組在術(shù)后2-4w較control組明顯增多(P＜0.001，P＜0.001，P＜0.001)，在術(shù)后3-4w較USW組和BMSCs組明顯增多(P＜0.01，P＜0.01;P＜0.05，P＜0.001);且BMSCs組和USW+BMSCs組MBP表達(dá)高峰持續(xù)時(shí)間延長。⑥BDNF陽性細(xì)胞計(jì)數(shù):BDNF的表達(dá)在SCI術(shù)后2w達(dá)到最高峰值，3個(gè)損傷組的高峰持續(xù)時(shí)間延長;術(shù)

9、后1w、4w，USW組BDNF的表達(dá)量明顯高于control組(P＜0.001，P＜0.05);BMSCs組的表達(dá)在術(shù)后3-4w較control組明顯增高（P＜0.001，P＜0.001）;USW+BMSCs組的表達(dá)在術(shù)后2-4w較control組、USW組均明顯增高(P＜0.001)，在術(shù)后3-4w明顯高于BMSCs組(P＜0.05，P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　單純USW治療即促進(jìn)SCI后運(yùn)動功能的恢復(fù);BMSCs移