高壓氧聯合骨髓間充質干細胞移植對脊髓損傷大鼠炎癥反應的影響及其相關機制的研究.pdf

1、目的:
　　脊髓損傷是中樞神經系統(tǒng)的嚴重創(chuàng)傷之一，導致無法扭轉的并發(fā)癥和后遺癥，嚴重影響患者的日常生活能力。如何快速有效的治療脊髓損傷仍然是現在以及未來的研究熱點及難點。近年來干細胞移植治療脊髓損傷一直是基礎及臨床研究的方法之一，而高壓氧作為臨床上廣泛運用的治療方法之一，其治療脊髓損傷的機制仍然處于進一步研究過程中。大量文獻表明，骨髓間充質干細胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells，BMSCs)移

2、植可減輕脊髓繼發(fā)性損傷，降低炎癥浸潤，促進感覺及運動機能恢復。大量臨床研究證明，高壓氧療法(Hyperbaric Oxygen therapy，HBOT)可以提高缺血缺氧區(qū)域氧分壓及氧含量，抑制外周血中炎癥細胞活性，降低炎癥因子水平。本文通過對NF-κB炎癥信號通路的研究，探討在骨髓間充值干細胞移植基礎上應用高壓氧療法對脊髓損傷大鼠損傷組織的作用，從而減輕炎癥反應。
　　方法:
　　1.大鼠骨髓間充質干細胞收集，培養(yǎng)及鑒定。

3、
　　2.分組:成年雄性SD大鼠，采用鉗夾法建立脊髓損傷模型，造模成功的大鼠分為假手術組（Sham組）、脊髓損傷組（SCI組）、脊髓損傷+骨髓間充質干細胞組（SCI+BMSCs組）、脊髓損傷+骨髓間充質干細胞+高壓氧組（SCI+BMSCs+HBO組）四個實驗組。
　　3.行為學評定:脊髓損傷術前1天及術后1、3、7、14天使用運動功能評分(BBB評分)觀察后肢運動功能恢復情況。
　　4.采用Western Blot法測

4、定脊髓組織NF-κB、IκB-α、TNF-α、IL-1β含量。
　　5.ELISA法測定脊髓組織TNF-α、IL-1β表達量。
　　6.免疫組化法測定脊髓組織石蠟切片NF-κB p65蛋白表達量。
　　7.脊髓組織石蠟切片HE染色。
　　結果:
　　第3代骨髓間充質干細胞貼壁生長，多為長梭形，有細小突起，可成旋渦狀及放射狀生長。流式細胞儀檢測CD29及CD90高表達，分別為99.38％。99.48％;CD4

5、5低表達，為1.52％。脊髓損傷后損傷組織NF-κB、TNF-α及IL-1β蛋白的含量均明顯增加，IκB-α蛋白含量以及BBB評分均明顯減少;與Sham組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);BMSCs移植后，NF-κB、TNF-α及IL-1β蛋白的含量在第3天，第7天，第14天較SCI組明顯降低，IκB-α蛋白含量及BBB評分在第3天，第7天，第14天較SCI組明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);高壓氧干預后，NF-κB、TN

6、F-α及IL-1β蛋白的含量在第3天，第7天，第14天較SCI+BMSCs組明顯降低，IκB-α蛋白含量及BBB評分在第3天，第7天，第14天較SCI+BMSCs組明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。蘇木精-伊紅染色(HE染色)假手術組脊髓未見明顯炎癥細胞浸潤;SCI組有大量炎性細胞浸潤;SCI+BMSCs組炎癥反應減輕;SCI+BMSCs+HBO組炎癥反應進一步減輕，炎性細胞明顯減少。
　　結論:
　　脊髓損傷后損