牛干擾素-τ基因的克隆及其在大腸桿菌中的融合表達(dá).pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩82頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、本研究采用克隆測(cè)序技術(shù),首次測(cè)定了中國(guó)荷斯坦奶牛干擾素-τ(bIFN-τ)成熟蛋白基因的編碼區(qū)(CDS)全序列(GenBank登錄號(hào):DQ680846、DQ680847),并利用生物信息學(xué)方法對(duì)bIFN-τ的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行了預(yù)測(cè),結(jié)果表明: bIFN-τ成熟蛋白基因的CDS全序列長(zhǎng)度為519bp,編碼172個(gè)氨基酸的bIFN-τ。對(duì)bIFN-τ成熟蛋白基因的CDS全序列和GenBank上已公布的相關(guān)序列進(jìn)行聚類分析,可將其聚為4

2、類,發(fā)現(xiàn)了新的一類bIFN-τ(τ4)和六種新亞型(τle、τ3f、τ3g、τ3h、τ4a、τ4b)。DQ680846屬于τ4類的一種亞型,標(biāo)記為τ4a;DQ680847屬于τ3類的一種亞型,標(biāo)記為τ3f。各bIFN-τ基因核苷酸序列間的同源性在92.7%~99.8%之間,推導(dǎo)氨基酸序列間的同源性在88.5%~99.4%之間;τ4a、τ3f與其他bIFN-τ基因核苷酸序列間的同源性分別在94.0%~97.1%、92.9%~99.6%之間

3、,推導(dǎo)氨基酸序列間的同源性分別在91.4%~96.0%、88.5%~99.4%之間。不同物種IFN-τ基因可聚為4類:普通牛與美洲野牛、水牛聚為一類;綿羊、山羊、麝香牛聚為另一類;大額牛、馬鹿、麝香鹿聚為第三類;長(zhǎng)頸鹿單獨(dú)為一類。各物種IFN-τ基因核苷酸序列間的同源性在84.6%~99.2%之間,推導(dǎo)氨基酸序列間的同源性在68.4%~97.7%之間;中國(guó)荷斯坦奶牛bIFN-τ基因τ4a和τ3f與其他物種IFN-τ基因核苷酸序列間的同源

4、性在87.7%~99.2%之間,推導(dǎo)氨基酸序列間的同源性在74.1%~97.7%之間。對(duì)blFN-τ的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)bIFN-τ氨基酸序列中有一個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn),Asn78可被糖基化。blFN-τ中存在5個(gè)主要的疏水區(qū),分別位于氨基酸序列的53~68位、75~86位、96~104位、114~121位和139~156位。bIFN-τ氨基酸序列中有6個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn):Ser25、Serl37、Serl53、Ser

5、l55、Thr119和Tyr136。bIFN-τ的Gysl和Cys99、Cys29和Cysl39各自形成兩個(gè)二硫鍵,以維持其立體結(jié)構(gòu)。bIFN-τ的三維結(jié)構(gòu)是以5個(gè)α-螺旋為基礎(chǔ)構(gòu)成的,α-螺旋由111個(gè)氨基酸殘基形成,占64.53%;螺旋之間為無規(guī)卷曲,由61個(gè)氨基酸殘基形成,占35.47%。bIFN-τ氨基酸序列3~155位是包括IFN-α,β,ω,τ,δ等在內(nèi)的I型IFN家族的典型保守結(jié)構(gòu)功能域。由此可以推測(cè)出bIFN-τ具有I型

6、IFN所共有的抗病毒、抗細(xì)胞增生、免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)功能。 本研究將bIFN-τ基因定向克隆到原核表達(dá)載體pET-28a(+)中,構(gòu)建了重組融合表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-blFN-τ,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),優(yōu)化表達(dá)條件,并初步純化重組融合蛋白,結(jié)果表明: blFN-τ基因在重組融合表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-bIFN-τ中的插入方向和讀碼框均正確;該基因已在大腸桿菌BL21(DE3)中實(shí)現(xiàn)了融合表達(dá),其表達(dá)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論