惡性轉(zhuǎn)化BEAS-2B細(xì)胞lncRNAs與miRNAs的差異表達(dá).pdf

1、目的：長鏈非編碼RNA(lncRNA)在一定范圍內(nèi)調(diào)控著生物功能的延續(xù)或中斷，其差異表達(dá)已被認(rèn)為是腫瘤的一個標(biāo)志性特征。微小RNA(miRNA)可負(fù)向調(diào)節(jié)基因表達(dá)，且可與 lncRNAs相互作用。本研究旨在探索致癌物誘導(dǎo)的永生化人支氣管上皮細(xì)胞(BEAS-2B) lncRNAs和miRNAs的差異表達(dá)，為進(jìn)一步的機(jī)制研究提供依據(jù)。
　　方法：⑴以煤焦瀝青煙氣提取物(coal tar pitch extracts，CTPE)、煙草煙

2、霧凝集物(CSC)為染毒物，處理BEAS-2B細(xì)胞，體外構(gòu)建細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化模型。以苯并(a)芘[benzo(a) pyrene，B(a)P]為陽性對照，染毒濃度5μg/mL；二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)為溶劑對照，染毒濃度2‰；CTPE及CSC染毒濃度分別為2.4μg/mL與25μg/mL。通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、劃痕實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖活力及凋亡率檢測評估細(xì)胞是否發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。⑵對空白對照組和分別經(jīng)

3、B(a)P及 CTPE誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化 BEAS-2B進(jìn)行LncRNA/mRNA表達(dá)譜芯片及MicroRNA表達(dá)譜芯片檢測。⑶生物信息學(xué)方法篩選差異表達(dá)lncRNAs及miRNAs，并進(jìn)行real time-PCR驗(yàn)證。
　　結(jié)果：①BEAS-2B細(xì)胞對于 CSC的半數(shù)抑制濃度(median inhibitory concentration，IC50)約為0.084mg/mL。B(a)P、CTPE、CSC染毒20代、30代細(xì)胞鏡下輪

4、廓模糊，胞內(nèi)出現(xiàn)空泡，細(xì)胞膜腫脹變形，出現(xiàn)畸變的細(xì)胞核等。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示B(a)P、CTPE、CSC染毒細(xì)胞遷移距離均大于DMSO組細(xì)胞(均P<0.05)；B(a)P、CTPE、CSC組細(xì)胞克隆形成數(shù)均高于DMSO組(均P<0.05)，隨代數(shù)增加，克隆形成數(shù)也增加(均 P<0.05)；細(xì)胞增殖活力實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 B(a)P、CTPE、CSC染毒細(xì)胞吸光度值均大于DMSO組(均P<0.05)，隨代數(shù)增加，細(xì)胞增殖活力增大(均 P<0.05

5、)；凋亡率檢測發(fā)現(xiàn)B(a)P、CTPE、CSC染毒細(xì)胞凋亡率均小于DMSO組(均P<0.05)，且隨細(xì)胞代數(shù)增加，凋亡率下降(均P<0.05)。②以Fold change≥1.5，P<0.05進(jìn)行差異lncRNAs篩選，B(a)P30組中檢出差異表達(dá)lncRNAs263種，其中，較之空白對照組表達(dá)上調(diào)的有159種，下調(diào)104種；CTPE30組中有707種lncRNAs差異表達(dá)，其中，有408種表達(dá)上調(diào)，299種下調(diào)；且差異表達(dá)lncRN

6、As中antisense與intergenic兩類比例較高。以Fold change≥1.5，P<0.05進(jìn)行差異mRNAs篩選，B(a)P30組中共檢出差異表達(dá)mRNAs159種，其中，表達(dá)上調(diào)的有99種，60種下調(diào)；CTPE30組中有569種mRNAs差異表達(dá)，其中，有357種上調(diào)，212種下調(diào)。③利用Fold change≥2.0，P<0.05進(jìn)行差異miRNAs篩選，B(a)P30組中共檢出差異表達(dá)miRNAs127種，其中，較

7、之空白對照組表達(dá)上調(diào)的有29種，98種下調(diào)；CTPE30組中有78種miRNAs差異表達(dá)，其中，有52種表達(dá)上調(diào)，26種下調(diào)。④與空白對照組及DMSO組相比，B(a)P、CTPE、CSC處理組lncRNAs中有ENST00000501520、ENST00000556926、ENST00000535078表達(dá)上調(diào)，TCONS_00011820表達(dá)下調(diào)；miRNAs中hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521表達(dá)下調(diào)。