貧鈾誘導(dǎo)BEAS-2B細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化前后差異表達(dá)基因的篩選.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?闡明難溶性貧鈾氧化物致BEAS-2B細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制,為貧鈾的危害及其防治提供有益的線索.實(shí)驗(yàn)方法:主要采用抑制消減雜交、cDNA轉(zhuǎn)化重組技術(shù)和DNA測序方法分析比較了難溶性貧鈾氧化物誘發(fā)人永生化支氣管上皮細(xì)胞BEAS-2B細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化前后差異表達(dá)基因的表達(dá)情況.主要結(jié)果如下:1運(yùn)用LD-RTPCR(長片斷反轉(zhuǎn)錄和線性PCR擴(kuò)增)方法和cDNA轉(zhuǎn)化重組技術(shù),檢測了BEAS-2B細(xì)胞和DU-BEAS-2B(惡性轉(zhuǎn)化后18代

2、)相關(guān)基因的表達(dá)差異;利用SSH技術(shù)構(gòu)建了BEAS-2B細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化前后的差異表達(dá)基因文庫,對(duì)文庫中cDNA克隆進(jìn)行單向測序:623個(gè)有插入片段的克隆共代表444個(gè)不同基因.推論:;兩個(gè)差減文庫的cDNA可能代表了DU誘發(fā)人永生化支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化前后差異表達(dá)的基因,此為進(jìn)一步研究DU誘發(fā)惡性化病變發(fā)生的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ).2對(duì)623個(gè)克隆測序結(jié)果進(jìn)行了同源性比較、功能預(yù)測等相應(yīng)的生物信息學(xué)分析,并參考國際互聯(lián)網(wǎng)上相關(guān)的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行了

3、相應(yīng)的比較和分析,探討了差異表達(dá)基因的功能和意義,其中有癌基因、抑癌基因、細(xì)胞生長代謝相關(guān)基因、細(xì)胞周期調(diào)控基因、轉(zhuǎn)錄因子、免疫相關(guān)基因、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)基因等重要基因,26個(gè)未知序列中可能包括含有與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)的重要基因,并有可能存在一些首次發(fā)現(xiàn)的與肺癌和細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化發(fā)生相關(guān)的新基因,這有待于我們進(jìn)一步驗(yàn)證,這些基因也是我們進(jìn)行基因功能研究的重要候選基因.為進(jìn)一步研究DU誘發(fā)BEAS-2B細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制