2型谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶過(guò)表達(dá)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞耐藥性的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討2型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（TG2）過(guò)表達(dá)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞化療耐藥的影響及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：⑴以TG2慢病毒過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建轉(zhuǎn)染細(xì)胞，設(shè)3組：TG2組即轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)TG2組、CON組即不轉(zhuǎn)染空白組、NC組即轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照組。各組在培養(yǎng)基中培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染72h后，以嘌呤霉素1ug/ml持續(xù)篩選5天，熒光顯微鏡觀察慢病毒的感染效率。熒光定量PCR檢測(cè)各組的TG2的mRNA表達(dá)量，Western-blot技術(shù)檢測(cè)各組中TG2蛋白的表達(dá)

2、情況。⑵各組細(xì)胞都用阿霉素處理培養(yǎng)，用MTT法檢測(cè)阿霉素對(duì)各組細(xì)胞處理后的半數(shù)致死率（IC50），細(xì)胞流式檢測(cè)各組的凋亡情況。⑶進(jìn)一步用Western-blot技術(shù)檢測(cè)各組中凋亡相關(guān)蛋白BCL-2、capase-3，以及PAKT/AKT的表達(dá)情況。⑷用TG2抑制劑MDC處理TG2組后檢測(cè)TG2、BCL-2、Capase-3，以及PAKT/AKT表達(dá)和IC50情況。
　　結(jié)果：①TG2組、CON組、NC組比較，TG2組的TG2轉(zhuǎn)錄m

3、RNA和蛋白表達(dá)比CON組和NC組水平明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。②MTT結(jié)果顯示TG2組IC50為（40.7±3.56）ug/ml，與CON組（17.4±1.45）ug/ml和NC組（22.7±2.0）ug/ml比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)（。FCM顯示TG2組的凋亡率為（38.50±5.50）％，與CON組(87.4±12.5)%和NC(53.1±4.7)%組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③Western-blot結(jié)果顯示，TG2組比CON組C

4、apase-3的表達(dá)下降，而B(niǎo)CL-2、AKT/P-AKT表達(dá)上升（P＜0.05）。與NC組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④經(jīng)過(guò)TG2抑制劑MDC處理TG2組的AKT表達(dá)降低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P＜0.05），而B(niǎo)CL-2、Capase-3差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但隨MDC濃度增加在一定范圍內(nèi)對(duì)阿霉素的IC50值下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：⑴乳腺癌MCF-7細(xì)胞中TG2的過(guò)表達(dá)會(huì)使其阿霉素耐藥性增加，并且可以被其抑制劑抑制。⑵TG