人乳腺癌細(xì)胞MCF-7紫杉醇耐藥細(xì)胞株的建立及其耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、腫瘤多藥耐藥是導(dǎo)致臨床腫瘤化療失敗的主要原因之一，腫瘤多藥耐藥模型的建立及其性質(zhì)的研究，對(duì)腫瘤治療的順利進(jìn)行具有十分重要的意義。本論文主要通過建立兩株腫瘤多藥耐藥模型，測定其較為完備的耐藥譜，對(duì)其各項(xiàng)生物學(xué)特性進(jìn)行比較研究，并通過親和甄別磁珠法尋找藥物結(jié)合蛋白，有望找到新的藥物靶點(diǎn)。一方面為臨床用藥提供參考，同時(shí)也為從分子蛋白質(zhì)水平分析耐藥細(xì)胞的各項(xiàng)機(jī)制提供依據(jù)。 本論文分別采用低濃度加量持續(xù)誘導(dǎo)法和高濃度短期作用法建立人乳腺癌

2、MCF-7細(xì)胞的耐紫杉醇模型，分別將其命名為MCF-7/Taxola和MCF-7/Taxolb。其主要的生物學(xué)特性，包括體外耐藥性、動(dòng)力學(xué)周期分布、表型變化、側(cè)群細(xì)胞變化、胞內(nèi)藥物蓄積等，在本實(shí)驗(yàn)中作了較為全面和詳細(xì)的研究。體外耐藥譜分析表明，MCF-7/Taxola和MCF-7/Taxolb細(xì)胞的紫杉醇半數(shù)抑制濃度(IC50)分別是親代MCF-7細(xì)胞的525倍和330倍，并且都對(duì)多種化療藥物交叉耐藥；細(xì)胞周期分析表明，MCF-7/Ta

3、xola細(xì)胞S期細(xì)胞顯著增加，G1期細(xì)胞減少，MCF-7/Taxolb細(xì)胞各個(gè)期變化不大；免疫組化分析表明，MCF-7/Taxola細(xì)胞P-gp、LRP和GSTπ的表達(dá)水平較親代有顯著增加，而MCF-7/Taxolb細(xì)胞GSTTπ的表達(dá)水平較親代也有顯著增加，兩株細(xì)胞ER、PR陽性都表達(dá)丟失；光鏡下耐藥細(xì)胞MCF-7/Taxola明顯變大并且形態(tài)不規(guī)則，而MCF-7/Taxolb變化不大；電鏡下MCF-7/Taxola表面纖絨毛成小球狀

4、隆起和絮狀，而MCF-7/Taxolb表面成絮狀；側(cè)群細(xì)胞分析表明，MCF-7/Taxolb細(xì)胞內(nèi)側(cè)群細(xì)胞的含量遠(yuǎn)高于親本細(xì)胞和MCF-7/Taxola細(xì)胞；通過HPLC法，在穩(wěn)定生長的模型MCF-7/Taxola中撤藥培養(yǎng)10天的細(xì)胞內(nèi)仍可以檢測到Taxol的蓄積。 和傳統(tǒng)MDR機(jī)制研究方法不同，本論文借助生物素一親和素系統(tǒng)，采用親和甄別磁珠法篩選直接獲得能與紫衫醇特異性結(jié)合的多肽和靶點(diǎn)蛋白，以細(xì)胞內(nèi)藥物結(jié)合蛋白為研究對(duì)象，分

5、析親本和耐藥細(xì)胞中紫衫醇特異性結(jié)合的差異蛋白信息，SDS-PAGE銀染MCF-7/Taxola主有一缺失條帶，蛋白測序主要涵蓋Heatshockprotein、Actinin、Dermcidinprecursor、Homerin等共計(jì)25種蛋白，其中有2種蛋白已經(jīng)成為抗腫瘤新藥研究的靶點(diǎn)，其它蛋白暫無和腫瘤耐藥研究的相關(guān)報(bào)道，不過這些蛋白中有些歸屬信號(hào)通路相關(guān)蛋白，很可能成為新的腫瘤耐藥靶點(diǎn)蛋白。 本實(shí)驗(yàn)所建立的兩株耐藥模型具有