苦參堿對乳腺癌MCF-7細胞作用的研究.pdf

1、目的:本研究應(yīng)用體外細胞培養(yǎng)方法,采用多種檢測手段,觀察苦參堿對乳腺癌MCF-7細胞的抑制作用和誘導(dǎo)細胞凋亡作用,并對其作用機制進行了初步探討,為苦參堿應(yīng)用于乳腺癌的臨床輔助治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:乳腺癌MCF-7細胞在RPMI-1640培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)和傳代,設(shè)立對照組和多種藥物濃度實驗組。實驗組細胞加入不同濃度的苦參堿,對照組細胞加等量培養(yǎng)液進行如下實驗。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。(1)用MT

2、T法檢測MCF-7細胞生長抑制率;(2)在倒置顯微鏡、正置光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡下觀察MCF-7細胞形態(tài)學(xué)變化;(3)應(yīng)用流式細胞術(shù)(Flow cytometry,FCM)分別檢測MCF-7細胞凋亡情況、MCF-7細胞線粒體跨膜電位及MCF-7細胞Bax、Bcl-2蛋白表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.苦參堿對MCF-7細胞的生長抑制率測定
　　 苦參堿作用于乳腺癌MCF-7細胞24h、48h和72h的生長抑制

3、率分別介于6.01％～35.58％,7.97％～51.56％和11.98％～68.31％不同濃度的苦參堿對MCF-7細胞的生長抑制率與對照組相比存在顯著差異(P＜0.05),且呈劑量一效應(yīng)正相關(guān)及時間一效應(yīng)正相關(guān)。
　　 2.MCF-7細胞形態(tài)學(xué)改變
　　 對照組MCF-7細胞生長良好,緊密排列,呈梭形或多突起形態(tài),突起較長,細胞漿和細胞核均嗜堿性,可見較多的病理性核分裂象。沒有發(fā)現(xiàn)凋亡細胞。實驗組細胞突起短縮、胞漿減少

4、,逐漸變圓,胞漿內(nèi)可見大小不等的空泡,細胞漿嗜酸性隨苦參堿濃度增高而逐漸增強。染色質(zhì)凝集呈團塊狀,出現(xiàn)不同程度的核固縮、碎裂、核分裂相減少及核偏位,呈新月形,形似“印戒細胞”。少數(shù)細胞可見細胞膜向外膨出的“出芽”現(xiàn)象,個別細胞外形似玫瑰花環(huán)狀。熒光顯微鏡下可見凋亡及壞死細胞,且隨濃度的增高凋亡和壞死細胞也逐漸增多。這些形態(tài)學(xué)改變是細胞凋亡過程中不同階段的形態(tài)特點。
　　 3.流式細胞儀檢測MCF-7細胞凋亡
　　 苦參堿

5、對MCF-7細胞有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用。藥物作用24h細胞凋亡發(fā)生率介于4.10％～19.80％之間,與對照組相比有顯著差異(P＜0.05)。隨苦參堿濃度的增高,凋亡的發(fā)生率也相應(yīng)增高。
　　 4.線粒體跨膜電位的檢測
　　 苦參堿處理MCF-7細胞24h,羅丹明123染色后經(jīng)流式細胞儀檢測。結(jié)果顯示:苦參堿處理組MCF-7細胞羅丹明染色陽性數(shù)(％)明顯低于對照組,存在顯著差異(P＜0.05),并隨苦參堿作用濃度的增高而減

6、少,呈負相關(guān)。由此判定苦參堿能夠引起MCF-7線粒體跨膜電位顯著下降,并隨藥物濃度的增加而下降程度加大。
　　 5.MCF-7細胞Bax,Bcl-2蛋白表達
　　 苦參堿作用于MCF-7細胞24h和48h后,應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測Bax、Bcl-2蛋白表達顯示,Bax蛋白表達上調(diào),與對照組相比,存在顯著差異(P＜0.05),且隨作用濃度增高表達增高,呈正相關(guān)。Bcl-2蛋白表達,除0.25mg/mL苦參堿作用24h組與對照組

7、比較沒有差異性外,其余各藥物組與對照組相比均存在顯著差異(P＜0.05),且隨藥物濃度的增加Bcl-2表達降低。
　　 結(jié)論:
　　 1.苦參堿對乳腺癌MCF-7細胞有明顯的生長抑制作用,呈劑量一效應(yīng)正相關(guān)及時間一效應(yīng)正相關(guān)?？鄥A能夠誘導(dǎo)乳癌MCF-7細胞發(fā)生凋亡,凋亡率與藥物劑量呈正相關(guān)。
　　 2.苦參堿誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細胞發(fā)生凋亡,其可能的機制是通過某種途經(jīng)上調(diào)Bax基因和下調(diào)Bcl-2基因的表達,啟