乳腺癌細(xì)胞株MCF-7誘導(dǎo)血小板聚集機(jī)制.pdf

1、目的：探討人乳腺癌細(xì)胞MCF-7誘導(dǎo)血小板聚集的機(jī)制，為今后可能通過抗血小板治療來抗腫瘤轉(zhuǎn)移提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.應(yīng)用不同濃度MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)血小板聚集（Tumor cell-induced plateletaggregation，TCIPA），并用四種不同的血小板活化途徑抑制劑阿司匹林、Apyrase、7E3、SZ-1干預(yù)MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)的TCIPA。
　　 2.應(yīng)用血小板聚集儀檢測(cè)血小板

2、聚集率。
　　 3.應(yīng)用相差顯微鏡觀察TCIPA現(xiàn)象以及血小板活化途徑抑制劑干預(yù)后的TCIPA細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)變化。
　　 4.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TCIPA及干預(yù)過程中血小板、腫瘤細(xì)胞表面GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb的表達(dá)，并分析該過程中不同時(shí)間點(diǎn)血小板聚集率及血小板膜GPⅡb/Ⅲa和GPⅠb的相關(guān)性。
　　 5.應(yīng)用ELISA法檢測(cè)TCIPA及干預(yù)過程中TXB2的生成。
　　 結(jié)果：
　　 1.0，0.

3、05x106/ml，0.5x106/ml，1×106/ml，5x106/ml，50x106/ml六個(gè)不同濃度組MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)的血小板最大聚集率分別為0；7.7±0.5％；21.7±1.2％；28.5±1.5％；43.3±1.7％；44.5±1.3％。0～5x106/ml這五個(gè)濃度組誘導(dǎo)的血小板最大聚集率逐漸升高（P<0.05）；當(dāng)濃度從5x106/ml升至50x106/ml時(shí)血小板最大聚集率未顯著升高（p>0.05）。相差顯微鏡亦觀

4、察到MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)的血小板聚集現(xiàn)象。
　　 2.MCF-7誘導(dǎo)TCIPA至50％最大聚集率時(shí)，血小板膜表面GPⅡb/Ⅲa及GPⅠb的表達(dá)量為853±124，137±21；MCF-7細(xì)胞表面GPⅡb/Ⅲa及GPⅠb的表達(dá)量為178±22，344±53，較對(duì)照組（未誘導(dǎo)組）均顯著上調(diào)（p均<0.05）。TCIPA過程中各時(shí)間點(diǎn)血小板聚集率與血小板膜GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb的表達(dá)均呈正相關(guān)（r=0.968，P<0.05；r=0.9

5、98，p<0.05）；GPⅡb/Ⅲa與GPⅠb的表達(dá)亦呈正相關(guān)（r=0.971，p<0.05）。MCF-7誘導(dǎo)的TCIPA過程中TXB2的生成量為79.5±7.9，較對(duì)照組TXB2的生成量71.8±9.7無顯著性變化（p>0.05）。
　　 3.阿司匹林干預(yù)組TCIPA最大聚集率為43.3±1.5％，與對(duì)照組（43.3±1.7％）相比，無顯著的抑制作用（p>0.05），Apyrase、7E3、SZ-1干預(yù)組TCIPA最大聚集率分

6、別為21.5±1.3，30.4±1.8，26.7±1.2（％），與對(duì)照組（43.3±1.7％）相比，均顯著抑制了MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)的TCIPA（p均<0.05）。各抑制劑聯(lián)合干預(yù)組Apyrase+7E3，Apyrase+SZ-1，7E3+SZ-1，Apyrase+7E3+SZ-l，TCIPA最大聚集率分別為：20.5±1.2；17.7±1.1；16.9±1.5；11.7±1.2（％），與對(duì)照組（43.3±1.7％）相比，均顯著抑制了MC

7、F-7細(xì)胞誘導(dǎo)的TCIPA（P均<0.05），兩抑制劑聯(lián)合組比各單抑制劑組具有更顯著抑制作用（P均<0.05），三抑制劑聯(lián)合組比各兩抑制劑聯(lián)合組具有更顯著抑制作用（P均<0.05）。相差顯微鏡觀察到使用了聚集抑制劑干預(yù)TCIPA過程后，血小板聚集團(tuán)塊數(shù)量及體積明顯減小。
　　 4.血小板膜表面GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb熒光強(qiáng)度在TCIPA活化干預(yù)組分別為（532±40％，117±10％）較TCIPA活化組（853±124％，137

8、±21％）顯著降低（p均<0.05）。MCF-7細(xì)胞表面GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb熒光強(qiáng)度TCIPA活化干預(yù)組分別為（164±10％，336±54％）較TCIPA活化組（178±22％，344±53％）無顯著性差異（p均>0.05）。各活化途徑抑制劑對(duì)TCIPA過程中TXB2的生成幾乎沒有影響（F=1.45，P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.人乳腺癌細(xì)胞MCF-7能夠以濃度依賴方式誘導(dǎo)血小板發(fā)生聚集反應(yīng)（TCIPA

9、）。
　　 2.在MCF-7誘導(dǎo)的TCIPA過程中，血小板表面GPⅡb/Ⅲa及GPⅠb的表達(dá)顯著上調(diào)，應(yīng)用ADP-，GPⅡb/Ⅲa-，GPⅠb-Ⅸ-活化途徑抑制劑能夠抑制MCF-7誘導(dǎo)的TCIPA，聯(lián)合使用以上活化途徑抑制劑能夠起到更顯著的抑制作用。提示血小板ADP-，GPⅡb/Ⅲa-，GPⅠb-Ⅸ-這三條活化途徑可能共同參與了MCF-7誘導(dǎo)的TCIPA過程。
　　 3.在MCF-7誘導(dǎo)的TCIPA過程中，TXB2的生成