一、帕比司他協(xié)同過(guò)表達(dá)hepaCAM抑制前列腺癌生長(zhǎng)機(jī)制二、HepaCAM調(diào)控PI3K-Akt-AR-DDR通路促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞凋亡.pdf

1、本文研究了帕比司他協(xié)同過(guò)表達(dá)hepaCAM抑制前列腺癌生長(zhǎng)機(jī)制及HepaCAM調(diào)控PI3K-Akt/AR/DDR通路促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞凋亡。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：
　　目的：研究帕比司他（Panobinostat）逆轉(zhuǎn)抑癌基因肝細(xì)胞粘附分子（hepaCAM）表達(dá)，協(xié)同hepaCAM抑制前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。
　　方法：不同濃度帕比司他作用于體外培養(yǎng)的PC3和LNCap細(xì)胞，首先采用MTT法檢測(cè)帕比司他對(duì)細(xì)胞增殖

2、的影響，RT-PCR和Western Blot法檢測(cè)hepaCAM、組蛋白去乙?；福℉DACs）以及乙?；M蛋白H3賴氨酸9（Ac-H3K9）的表達(dá)變化。進(jìn)一步用不同因素處理細(xì)胞， MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期改變，RT- PCR和Western Blot法檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cyclinD1和增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的基因表達(dá)。
　　結(jié)果：帕比司他抑制PC3和LNCap細(xì)胞生長(zhǎng)與作用濃度增加和時(shí)間呈正相關(guān)

3、， hepaCAM mRNA、蛋白以及細(xì)胞核中Ac-H3K9表達(dá)隨帕比司他濃度升高而增加，HDAC1、 HDAC3、 HDAC4 mRNA和蛋白的表達(dá)隨濃度升高而降低；單獨(dú)過(guò)表達(dá)hepaCAM腺病毒和單獨(dú)使用帕比司他組兩種細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制且隨作用時(shí)間延長(zhǎng)抑制率增加，兩者聯(lián)用更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與單獨(dú)hepaCAM腺病毒組和帕比司他組相比，兩者聯(lián)用 S期細(xì)胞比例明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且可進(jìn)

4、一步下調(diào)cyclinD1、 PCNA mRNA和蛋白的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：帕比司他可通過(guò)抑制HDACs活性，加強(qiáng)PCa PC3和LNCap細(xì)胞組蛋白 H3 N-端的賴氨酸殘基乙?；?，逆轉(zhuǎn) hepaCAM表達(dá)；hepaCAM腺病毒和帕比司他聯(lián)用可協(xié)同抑制PC3和LNCap細(xì)胞生長(zhǎng)，作用機(jī)制可能與下調(diào)cyclinD1和PCNA的表達(dá)有關(guān)。
　　第二部分：
　　目的：研究過(guò)表達(dá)hepaCAM對(duì)

5、前列腺癌細(xì)胞凋亡的影響及分子機(jī)制。
　　方法：過(guò)表達(dá)hepaCAM腺病毒感染前列腺癌細(xì)胞PC3（雄激素非依賴型）及LNCap（雄激素依賴型）細(xì)胞株后，Hoechst33258染色、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡；Western Blot測(cè) caspase家族信號(hào)分子Procaspase8、cleaved caspase3和cleaved caspase9表達(dá)以及DNA損傷標(biāo)志物γ-H2AX和DNA損傷修復(fù)反應(yīng)（DNA damage res

6、ponse,DDR）標(biāo)志物p-ATM蛋白表達(dá)；進(jìn)一步分別運(yùn)用AR通路和PI3K-Akt通路激活劑和抑制劑處理細(xì)胞后， Western Blot檢測(cè) AR、PSA、p-Akt、Procaspase8、cleaved caspase3、cleaved caspase9、γ-H2AX和p-ATM等蛋白表達(dá)以及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各處理組細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：⑴與空白組和空載組相比，感染hepaCAM腺病毒組加重前列腺癌細(xì)胞 DNA損傷，減弱