eEElA2在前列腺癌中的高表達(dá)促進(jìn)前列腺癌的增殖以及抑制凋亡.pdf

1、目的：
　　研究eEF1A2基因促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞增殖以及抑制其凋亡的作用及其可能的作用機(jī)制，為該基因在將來(lái)的前列腺癌臨床治療中提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科通過(guò)術(shù)中冰凍切片，HE染色的方法收集前列腺癌癌組織和癌旁組織標(biāo)本共30例。
　　2.在RNA水平用RT-PCR技術(shù)、在蛋白水平用免疫組化技術(shù)檢測(cè)eEF1A2在30例前列腺癌癌組織與癌旁組織表達(dá)及其差異性。

2、>　　3.用特異性siRNA干擾技術(shù)在前列腺癌細(xì)胞系DU-145和PC-3中抑制eEF1A2的表達(dá)，采用CCK8方法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活力，用克隆形成方法檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力。用流式細(xì)胞儀法來(lái)檢測(cè)細(xì)胞周期分布和凋亡水平。
　　4.Western Blot方法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.RT-PCR和免疫組化的結(jié)果均顯示eEF1A2在前列腺癌癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織。
　　2.研究eEF1A2

3、在前列腺的相應(yīng)的生物學(xué)功能。分別在DU-145和PC-3細(xì)胞系中均轉(zhuǎn)染si-eEF1A2和si-NC（實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組），CCK8結(jié)果顯示，si-eEF1A2實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞增殖能力明顯低于si-NC對(duì)照組，克隆形成結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組的克隆數(shù)量和大小均低于對(duì)照組。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的凋亡水平明顯高于對(duì)照組細(xì)胞。
　　3.Western Blot證明在eEF1A2被抑制之后，凋亡相關(guān)蛋白cleavage-caspase3，線

4、粒體內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白BAD，BAX，PUMA的表達(dá)量明顯上調(diào)。
　　4.免疫組化的結(jié)果顯示，前列腺癌組織中，eEF1A2和cleavage-caspase3的表達(dá)量呈明顯的負(fù)相關(guān)，而BAD，BAX，PUMA與eEF1A2之間沒有相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　數(shù)據(jù)表明eEF1A2在前列腺癌中具有癌基因的特性，其功能表現(xiàn)在腫瘤增殖方面，其與eEF1A2抑制癌細(xì)胞的凋亡有關(guān)。在前列腺癌治療中，eEF1A2可能是一個(gè)潛在的治療靶位。