Prohibitin2促進前列腺癌細胞遷移機制的探究.pdf

1、目的：PHB2是蛋白抑制素家族(Prohibitin)中的一員，在很多腫瘤中高表達。PHB2是一種多功能的蛋白，既參與雌激素受體相關基因的轉錄又在線粒體中發(fā)揮著重要作用。前期實驗證明，PHB2在很多癌癥組織中高表達，且與腫瘤的轉移和侵襲有關。因此本實驗預探究PHB2參與前列腺癌腫瘤轉移和侵襲的機制以及其在此過程中所扮演的角色，為進一步解釋前列腺癌侵襲和遷移機制提供一定的實驗依據(jù)。
　　方法：(1)體外培養(yǎng)不同類型的前列腺上皮細胞系

2、，通過實時定量RT-PCR技術檢測不同惡性程度的前列腺上皮細胞系中PHB2的差表達。(2) PHB2促進前列腺癌細胞遷移:克隆PHB2的表達質粒，并合成PHB2的siRNA，前列腺癌細胞系PC3和DU145分別轉染該表達質粒和PHB2的siRNA，通過劃痕實驗分別檢測過表達和敲除PHB2對細胞遷移的影響。(3) PHB2調節(jié)Akt2的表達:用Western Blot的方法檢測過表達和抑制PHB2后，Akt2的蛋白表達變化情況，并加入放線

3、菌酮檢測PHB2對Akt2蛋白穩(wěn)定性的影響。(4)通過實時定量RT-PCR技術檢測過表達或干擾PHB2表達后，檢測PHB2是否通過表觀遺傳學修飾調控腫瘤相關基因的表達變化。
　　結果：PHB2與前列腺癌惡性進展呈正相關，前列腺癌細胞系PC3和DU145中PHB2的表達量明顯高于正常前列腺上皮細胞系。與對照相比，穩(wěn)定轉染PHB2表達質粒的前列腺癌細胞系PC3和DU145的遷移能力明顯增加，Akt2的蛋白表達量降低;抑制PHB2的表達

4、后，前列腺癌細胞系PC3和DU145的遷移能力減弱，Akt2的蛋白表達量增加，即PHB2負調節(jié)Akt2的蛋白表達，而對其mRNA水平的調節(jié)不明顯。并且干擾PHB2的表達后能增加Akt2的蛋白穩(wěn)定性。另外，PHB2可抑制腫瘤抑制基因TFPI2和p21的表達。
　　結論：PHB2在前列腺癌惡性進程中發(fā)揮著重要作用。PHB2可能通過調節(jié)Akt2的蛋白穩(wěn)定性、增加其表達量，促進前列腺癌細胞系PC3和DU145的遷移。與此同時，PHB2可抑