前列腺癌細(xì)胞凋亡通路基因表達(dá)研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士后學(xué)位論文前列腺癌細(xì)胞凋亡通路基因表達(dá)研究姓名：陳輝熔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士后專業(yè)：外科學(xué)（泌尿外科）指導(dǎo)教師：夏術(shù)階20040801和PC一3，評(píng)價(jià)凋亡反應(yīng)性。收集LNCaP和PC一3細(xì)胞后提取總RNA，合成eDNA探針并以生物素標(biāo)記，在凋亡通路特異基因寡核苷酸片段cDNA膜上進(jìn)行雜交反應(yīng)，檢測(cè)基因mRNA表達(dá)。(2)米托蒽醌、輻射與去雄激素作用前列腺癌細(xì)胞LNCaP，MTT實(shí)驗(yàn)和凋亡細(xì)胞染色分別評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性和誘導(dǎo)凋亡作用。收

2、集細(xì)胞提取總RNA并合成eDNA探針，在凋亡通路特異基因eDNA膜上進(jìn)行雜交反應(yīng)檢測(cè)基因mRNA表達(dá)，并以RTPCR確認(rèn)mRNA表達(dá)。(3)米托蒽醌作用LNCaP細(xì)胞，收集良性前列腺增生組織和前列腺癌組織，提取細(xì)胞總RNA，RT—PCR分別檢測(cè)TNFRSF8IImRNA表達(dá)，sP法檢測(cè)LNCaP細(xì)胞Ki1抗原的表達(dá)。結(jié)果：(1)Etoposide均能誘導(dǎo)兩種細(xì)胞凋亡，但PC3細(xì)胞的凋亡反應(yīng)性小于LNCaP細(xì)胞。與LNCaP細(xì)胞比較，PC

3、一3細(xì)胞顯著下調(diào)的基因有BCLIO、CIDEA、GADD45a和RIP2，以及Caspase4、5和6，顯著上調(diào)的基因?yàn)門(mén)RAF4。兩種細(xì)胞均強(qiáng)烈表達(dá)caspase一14和TNFR2。(2)米托蒽醌和輻射與去雄激素分別可協(xié)同誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞凋亡。米托蒽醌使TNFRSF8Ⅱ和TRAILR3基因mRNA表達(dá)上調(diào)，而輻射使DFFA、LTbR、mdm2、Myd88、TNFRSF8II、TNFRSFl4和TNFSF4基因mRNA表達(dá)上調(diào)，同時(shí)使S

4、urvivin和Bar基因mRNA表達(dá)下調(diào)。去雄激素使Mcl1、TNFRSFl4、MyD88和TNFSF4基因mRNA表達(dá)上調(diào)，使Bar、Survivin和TRAILR3基因mRNA表達(dá)下調(diào)。(3)米托蒽醌作用LNCaP細(xì)胞后的不同時(shí)間段均有TNFRSF8IImRNA表達(dá)，良性前列腺增生組織和前列腺癌組織也有TNFRSF8IImRNA表達(dá)。LNCaP細(xì)胞不表達(dá)Ki一1抗原。結(jié)論：(1)凋亡通路基因表達(dá)改變與前列腺癌細(xì)胞凋亡反應(yīng)性不同有關(guān)